絲裂原活化蛋白激酶激酶2在胰腺癌細胞解離中作用的實驗研究.pdf

1、胰腺癌是人惡性程度最高的腫瘤之一，具有極強的侵襲性和轉(zhuǎn)移性.而胰腺癌細胞從原發(fā)灶的解離是其侵襲轉(zhuǎn)移過程中最重要的第一步.因此明確腫瘤細胞解離的分子機制有助于闡明胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制，從而為開發(fā)新的抑制胰腺癌侵襲的治療方法提供具有重要價值的靶標.
　　在早期研究中，我們建立了兩種具有不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的胰腺癌細胞----解離型高轉(zhuǎn)移胰腺癌細胞（PC-1.0）和非解離型低轉(zhuǎn)移胰腺癌細胞(PC-1)[1-3].此外，PC-1.0細胞能

2、夠向培養(yǎng)液上清中分泌細胞解離因子(dissociation factor，DF)，它能夠使非解離型低轉(zhuǎn)移胰腺癌細胞(PC-1)發(fā)生解離[4,5].
　　前期研究中，應(yīng)用Representational Difference Analysis(RDA)法檢測出了PC-1及PC-1.0細胞中包括絲裂原活化蛋白激酶激酶2(mitogen-activated protein kinasekinase2，MEK2)在內(nèi)的8個差異表達的mRN

3、A[6].
　　Mitogen-activated protein kinase(MAPK)信號傳導(dǎo)通路參與細胞的增殖、分化、解離、應(yīng)激及凋亡[7-10]，而MEK2是MAPK細胞傳導(dǎo)通路中的一個關(guān)鍵激酶.有報道指出，MEK2與癌細胞的侵襲及細胞運動相關(guān)[11-13].另有文獻報道，MEK抑制劑能夠抑制黑色素瘤和肝細胞癌的侵襲[14-15].但目前尚未見MEK2在胰腺癌細胞解離及侵襲中作用的相關(guān)報道.
　　在本項研究中，應(yīng)用

4、免疫細胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)、RT-PCR探討胰腺癌細胞和胰腺癌組織中MEK2 mRNA、MEK2蛋白以及p-MEK(磷酸化MEK)蛋白的表達變化，以進一步明確MEK2在不同侵襲轉(zhuǎn)移能力的胰腺癌細胞和組織中的表達，以及MEK2在調(diào)控胰腺癌侵襲中的作用及其潛在的臨床意義.
　　目的：
　　探討MEK2在不同侵襲轉(zhuǎn)移能力的胰腺癌細胞及組織中的表達及其在細胞解離與侵襲中的作用。
　　方法：
　　應(yīng)用免疫細胞化學(xué)、免疫組織

5、化學(xué)和RT-PCR觀察胰腺癌細胞形態(tài)學(xué)變化，檢查胰腺癌細胞和組織中MEK2蛋白、p-MEK蛋白和MEK2 mRNA的表達變化.
　　結(jié)果：
　　解離型高轉(zhuǎn)移細胞PC-1.0和ASPC-1中，MEK2和p-MEK過度表達;在非解離型低轉(zhuǎn)移細胞PC-1和CAPAN-2中MEK2和p-MEK表達較弱，用含有DF的PC-1.0細胞的培養(yǎng)液上清培養(yǎng)PC-1和CAPAN-2細胞后，細胞呈解離狀態(tài).用U0126(一種MEK抑制劑)培養(yǎng)PC