雙源CT灌注成像評估胃癌腫瘤血管生成及其生物學行為的臨床應(yīng)用研究.pdf

1、胃癌發(fā)病居惡性腫瘤前列，我國每年死于胃癌的人數(shù)約有16萬人。因此，關(guān)于胃癌的診斷、治療和生物學行為的研究一直是人們關(guān)注的焦點。在擬行根治性胃大部分切除術(shù)之前能否對胃癌細胞的分化程度、胃壁浸潤深度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠隔轉(zhuǎn)移等情況做出準確、客觀的評估具有重要的實際意義。常規(guī)的影像手段在此方面雖然起到了積極的作用，但還有一定的限度。 腫瘤血管生成與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和預后關(guān)系密切，是目前基礎(chǔ)醫(yī)學研究的熱點。VEGF是反應(yīng)腫瘤血管生

2、成重要的分子生物學指標，MVD是評價腫瘤血管生成的金標準，但由于它們的測定需要獲得病理組織，操作過程復雜，有一定的創(chuàng)傷性，在臨床工作中較難推廣應(yīng)用，因此迫切需要一種無創(chuàng)、方便、快捷的腫瘤血管生成檢測方法，用以客觀、科學的評估腫瘤的生物學行為。 灌注是指血流通過毛細血管網(wǎng)將攜帶的氧和營養(yǎng)物質(zhì)輸送給組織細胞的過程，在一定程度上能反映器官、組織的血流動力學狀態(tài)和功能情況。通過CT來直觀顯示活體灌注過程并作定量分析的方法稱為CT灌注成像

3、。CT灌注成像是指在靜脈注射對比劑的同時對選定的層面進行動態(tài)掃描，以獲得該層面內(nèi)每一像素的時間—密度曲線，所反映的是對比劑在該器官中濃度的變化，進而間接反映組織器官內(nèi)灌注量的變化。CT灌注成像因其具有能更合理地評價腫瘤血管生成及腫瘤生物學行為的潛能，在腫瘤的影像學研究中越來越受到重視。 腫瘤血管生成能夠引起血容量、血流量及毛細血管通透性的變化，CT灌注成像能很好的反應(yīng)這些改變，在腫瘤的定量、定性研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。

4、 目前，灌注成像在空腔臟器報道很少，尚處于起步階段，其應(yīng)用價值有待于進一步的研究。因而，擬在此方面開展一系列深入的研究工作。研究胃癌灌注參數(shù)與腫瘤血管生成及腫瘤生物學行為的關(guān)系。 材料與方法： 1、臨床資料與病例分組 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2008年6月～2008年10月期間收治的胃腺癌病人69例。其中男49例，女20例，年齡41—79歲，平均58歲。根據(jù)術(shù)后病理腫瘤細胞分化程度將病例分為：低分化腺癌組(2

5、4例)，低中分化腺癌組(13例)，中分化腺癌組(12例)，中高分化腺癌組(6例)；依據(jù)胃壁浸潤深度，將病例分為肌層浸潤組(26例)，漿膜浸潤組(16例)，漿膜外組(13例)；根據(jù)局部淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(29例)、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(26例)；根據(jù)有無遠隔轉(zhuǎn)移及術(shù)后近期遠隔轉(zhuǎn)移分為遠隔轉(zhuǎn)移組(14例)，近期遠隔轉(zhuǎn)移組(8例)，無遠隔轉(zhuǎn)移組(47例)。 2、檢查方法 患者檢查前20min飲水1000ml，肌肉注射山莨

6、菪堿20mg。掃描前進行呼吸訓練，掃描時屏氣掃描。先行常規(guī)CT平掃，確定灌注掃描的靶層面，然后用高壓注射器經(jīng)肘靜脈注射對比劑歐乃派克50ml，注射速率6ml/s，注射后同速度跟注等量生理鹽水，注射開始后10s，采用西門子雙源CT體部灌注掃描序列對病人實行灌注掃描，覆蓋范圍28.8mm，掃描時間為40s。 3、圖像處理及分析 將掃描獲得的圖像傳至西門子圖像工作站進行分析。通過最大斜率法獲得血容量、血流量、達峰時間、灌注開始

7、時間等參數(shù)及相應(yīng)的功能圖。通過Patlak腫瘤灌注模型獲得Patlak血管通透性圖、Patlak血容量圖等功能圖及其具體參數(shù)數(shù)值。感興趣區(qū)直徑控制在1cm以內(nèi)，并且避免肉眼可辨認的血管影、液化壞死區(qū)及氣液交界產(chǎn)生的偽影區(qū)等影響測量準確性的部位。 4、標本的取材、處理和免疫組化染色 獲取行胃大部分切除術(shù)患者的手術(shù)標本，制作石蠟切片，采用鼠抗人CD34單克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體，對組織切片進行免疫組化染色。手術(shù)標本

8、的取材部位選擇在腫瘤灌注區(qū)域，胃粘膜組織取材選擇在距離癌灶邊緣>4cm，病理證實為非腫瘤組織的癌旁胃粘膜組織。所有標本以10％甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片5張，除1張做常規(guī)HE染色外，余片分別用CD34、VEGF單克隆抗體行免疫組化染色。陽性對照用已知陽性片，用0.01mol/L的PBS代替一抗作為陰性對照。 5、結(jié)果判定 MVD的測定按熱點法進行：切片先置于10×10倍光學顯微鏡下確定被CD34染成棕色的腫瘤

9、最高血管密度區(qū)域，然后置于20×10倍光學顯微鏡下選擇3個最高血管密度區(qū)域計數(shù)，求其平均值作為該患者的MVD值。任何被抗體染色的單個細胞或細胞團，不管它是否形成管腔，只要它與周圍的微血管、腫瘤細胞和其他連接組織成分有一個清楚的分隔，都認為是一個可計數(shù)的微血管。腫瘤內(nèi)硬化區(qū)以及與腫瘤交界處軟組織內(nèi)的微血管不計數(shù)，有厚平滑肌壁以及管腔直徑大于8個紅細胞直徑的血管也排除在外。VEGF判斷的標準和程序如下：先將染色強度打分：0分為無色，1分為淡

10、黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽性細胞所占百分比打分：無陽性細胞計為0分，陽性細胞數(shù)低于25％計為1分，陽性細胞數(shù)25％～50％計為2分，陽性細胞數(shù)超過50％計為3分。每張切片染色強度與陽性細胞百分比分值的乘積作為最后評分，乘積大于等于3分為免疫組化結(jié)果陽性，大于等于6分為免疫組化結(jié)果強陽性。 6.統(tǒng)計分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，以P<0.05作為具有顯著性差異的標準。 結(jié)果：

11、 1、在胃癌組織中VEGF的表達、MVD計數(shù)均明顯高于癌旁胃粘膜組織，具有顯著性差異，P<0.05，且在胃癌組織中VEGF的表達與MVD計數(shù)呈正相關(guān)，r=0.728。 2、胃癌的雙源CT灌注參數(shù)PBV、Patlak P、BF、BV值與MVD計數(shù)、VEGF表達評分值呈正相關(guān)。 3、隨著胃壁浸潤深度的增加，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、近期遠隔轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，VEGF的表達增強，MVD的計數(shù)增多，但不同分化程度各組織間VEGF表達、MVD計數(shù)

12、未見顯著性差異。 4、雙源CT灌注參數(shù)BF值、BV值遠隔轉(zhuǎn)移組和近期遠隔轉(zhuǎn)移組大于無遠隔轉(zhuǎn)移組，具有顯著性差異，P<0.05(F=6.555、5.972)。BV值肌層浸潤組和漿膜浸潤組小于漿膜外組，具有顯著性差異，P<0.05(F=5.460)。Patlak P肌層浸潤組小于漿膜外組，具有顯著性差異，PBV值與胃癌細胞分化程度呈負相關(guān)，BV、BF、Patlak P、PBV與浸潤深度呈正相關(guān)，BV、BF、Patlak P與遠隔轉(zhuǎn)移

13、程度呈正相關(guān)。Patlak P與淋巴轉(zhuǎn)移程度呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1、在胃癌組織中存在著腫瘤血管生成，在胃癌腫瘤血管生成的過程中VEGF發(fā)揮著重要的作用，且胃癌腫瘤血管生成與胃癌的胃壁浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠隔轉(zhuǎn)移等生物學行為密切相關(guān)，MVD計數(shù)、VEGF的表達可以反應(yīng)腫瘤的生物學行為。 2、雙源CT灌注成像參數(shù)Patlak P、BF、BV、PBV能夠反應(yīng)胃癌腫瘤血管生成及其生物學行為。BF值、BV值能夠?qū)δ芊癜l(fā)生