EB病毒BARF1及其變異型基因改變鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為機(jī)制的初步研究.pdf

1、背景和目的：EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）編碼早期基因BARF1具有轉(zhuǎn)化作用，在多數(shù)鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）組織中表達(dá)，可能在NPC發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)BARF1及其變異型基因過表達(dá)均提高了EBV陰性細(xì)胞系CNE的增殖和抗凋亡能力。本研究旨在進(jìn)一步探討B(tài)ARF1基因及其變異型對(duì)NPC細(xì)胞系HONE1生物學(xué)行為的影響及機(jī)制，為最終闡明BARF1參與NPC的

2、致癌機(jī)制提供依據(jù)。
　　方法：以B95-8型和V29A變異型BARF1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HONE1細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞為研究對(duì)象，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)和裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)BARF1原型和變異型基因?qū)ONE1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響；并采用表達(dá)譜芯片檢測(cè)和篩選BARF1基因轉(zhuǎn)染前后差異表達(dá)基因，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行功能注釋和生物反應(yīng)通路分析，繪制差異基因相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)圖，找出差異倍數(shù)大的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因，選

3、擇與細(xì)胞增殖、凋亡和遷移相關(guān)通路，在BARF1轉(zhuǎn)染細(xì)胞及裸鼠瘤組織中用real-time PCR進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證。
　　結(jié)果：（1）細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照細(xì)胞比較，BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞MTT吸光度值和平板克隆形成率增高（P均小于0.05）；順鉑誘導(dǎo)凋亡后細(xì)胞存活率提高，而細(xì)胞凋亡率降低（P均小于0.05）；細(xì)胞遷移和侵襲能力提高（P均小于0.05）。BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞之間細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲均無顯著

4、性差異。（2）裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照細(xì)胞比較，BARF1變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞裸鼠致瘤能力無明顯提高。（3）基因芯片分析：聚類分析顯示B95-8型和V29A變異型細(xì)胞聚類在同一簇中，與對(duì)照細(xì)胞比較，共同差異基因317條，其中上調(diào)94條，下調(diào)223條。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)多條差異基因與細(xì)胞粘附、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移侵襲等生物學(xué)過程有關(guān)，參與細(xì)胞因子受體相互作用通路、細(xì)胞粘附分子通路、ErbB信號(hào)傳導(dǎo)途徑通路和癌癥通路等。(4)通路

5、挑選及驗(yàn)證：Real-time PCR顯示，與對(duì)照細(xì)胞比較，BARF1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CDH1、TP63、MIR205HG、GJA1和S100A2表達(dá)下調(diào)，ZEB2表達(dá)上調(diào)，與芯片結(jié)果一致；BARF1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞形成裸鼠瘤組織中上述基因檢測(cè)結(jié)果與轉(zhuǎn)染細(xì)胞中一致。
　　結(jié)論：（1）BARF1原型和V29A變異型基因均可促進(jìn)NPC細(xì)胞系HONE1增殖、提高其抗凋亡能力和遷移侵襲能力，從而增強(qiáng)HONE1細(xì)胞腫瘤原性，V29A變異不影響其致