EB病毒BARF1原型和變異型基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、EB病毒BARFl原型和變異型基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響中文摘要背景和目的：EB病毒(EpsteinBarrvirus，EBV)編碼早期基因BARFl是新近確立的EBV致癌基因之一，其轉(zhuǎn)化作用已在多種細(xì)胞系中得到證實。由于BARFl在多數(shù)鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)和EBV相關(guān)胃癌組織中表達(dá)，推測其可能在NPC、胃癌等上皮細(xì)胞性腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期在檢測BARFl基因多態(tài)性時發(fā)現(xiàn)V

2、29A變異型在NPC中的檢出率高于健康人群。本研究旨在探討B(tài)ARFl基因?qū)PC細(xì)胞系腫瘤原性的影響以及BARFl基因變異型對其致癌潛能的影響，為研究BARFl參與NPC的作用及機(jī)制提供依據(jù)。方法：構(gòu)建BARFl基因原型(B958)和變異型(V29A)慢病毒表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)染EBV陰性NPC細(xì)胞系CNE，殺稻瘟菌素篩選，RTPCR和qRTPCR鑒定目的基因表達(dá)獲得BARFl原型和變異型基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。以對照病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞為對照，進(jìn)行MT

3、T實驗、細(xì)胞周期檢測、平板克隆形成實驗、凋亡誘導(dǎo)實驗和細(xì)胞遷移實驗，檢測BARFl原型和變異型基因?qū)NE細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。結(jié)果：(1)成功構(gòu)建BARFl基因原型和變異型基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，2種基因在EBV陰性NPC細(xì)胞系中均能有效表達(dá)。(2)細(xì)胞增殖實驗：BARFl原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞及對照病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和細(xì)胞周期細(xì)胞增殖指數(shù)均無顯著性差異(P均大于O05)。(3)凋亡誘導(dǎo)實驗：順鉑(299／m1)誘

4、導(dǎo)48h，感染BARFl原型和變異型慢病毒細(xì)胞的存活率均高于對照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性(P均小于005)，而細(xì)胞凋亡率低于對照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性(P均小于005)，變異型與原型之間細(xì)胞存活率和凋亡率均無顯著性差異(P均大于005)。(4)細(xì)胞遷移實驗：BARFl原型和變異型慢病毒感染細(xì)胞的遷移能力高于對照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性(氏005)，變異型與原型之間細(xì)胞遷移無顯著性差異(尸005)。結(jié)論：(1)BARFl基因?qū)B

5、V陰性NPC細(xì)胞系CNE無明顯促增殖作用，但可提高其抗凋亡能力和遷移能力，從而增強(qiáng)CNE細(xì)胞腫瘤原性，在NPC發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。(2)BARFlV29A變異型對BARFl致癌潛能無明顯影響。碩士研究生：楊穎(病原生物學(xué))指導(dǎo)老師：羅兵教授關(guān)鍵詞：EB病毒；BARFl；鼻咽癌；細(xì)胞生物學(xué)行為betweenprototypeandvariantBARF1一expressingcellswasnotsignificantincel

6、lviabilityandapoptosisrate(胗005)(4)TheprototypeBARF1一expressingcellsandvariantBARF1expressingcellsledtostrongermigrationcapabilitythanthenonexpressingcells(尸005)Conclusion：(1)BARFlgenehasnosignificanteffectontheprolifera

7、tionofEBVnegativeNPCcelllineCNE，butitcanincreaseitsantiapoptosisandmigrationabilities，suggestingBARF1enhancetheoncogenicabilityinCNEcellsandmayplayimportantrolesinthedevelopmentandprogressofNPC(2)TheV29AvariantofBARF1has