SHP-1對鼻咽癌細胞生物學特性的影響及其機制探討.pdf

1、本文主要從以下三個部分展開論述：
　　第一部分 SHP-1在鼻咽癌細胞株中的mRNA和蛋白表達水平測定
　　目的：檢測蛋白質酪氨酸磷酸酶SHP-1在鼻咽癌細胞株中表達情況。
　　方法：通過PCR、Western檢測不同分化程度的鼻咽癌細胞株CNE-1、CNE-2及5-8F中SHP-1的mRNA和蛋白表達水平。
　　結果：5-8F和CNE-1中SHP-1的mRNA和蛋白表達水平較高，CNE-2中SHP-1的mRNA

2、和蛋白表達水平較低，其中5-8F與CNE2、CNE-1與CNE-2的mRNA和蛋白水平差別具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），5-8F與CNE-1中的mRNA和蛋白水平差別不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：SHP-1在5-8F和CNE-1中mRNA和蛋白表達水平較高，在CNE-2的mRNA和蛋白水平表達較低。
　　第二部分 SHP-1下調對鼻咽癌細胞生物學行為的影響
　　目的：SHP-1SiRNA轉染高表達SH

3、P-1的5-8F細胞，探討SHP-1下調對鼻咽癌細胞生物學行為的影響。
　　方法：SHP-1SiRNA經(jīng)脂質體LipofectamineTM2000轉染高表達SHP-1的5-8F細胞，通過PCR、Western-blot檢測轉染前后細胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表達情況，MTT檢測轉染前后細胞增殖情況，流式細胞儀檢測轉染前后細胞凋亡及周期情況，Transwell侵襲小室模型測定細胞體外侵襲能力。
　　結果：SHP-1S

4、iRNA轉染高表達SHP-1的5-8F細胞,PCR、Western-blot檢測轉染后的5-8F細胞相比SiNeg組和Control組SHP-1的mRNA和蛋白表達水平明顯下降（P＜0.05）；MTT檢測轉染后5-8F細胞增殖加快（P＜0.05）；流式細胞儀檢測轉染后的5-8F細胞相比SiNeg和Control組細胞凋亡無明顯變化，三組間凋亡率差別無統(tǒng)計學意義；流式細胞儀檢測轉染后的5-8F細胞G1期明顯減少（P＜0.05），S期變化不

5、明顯（P＞0.05），G2/M期明顯增加（P＜0.05）；Transwell侵襲小室檢測轉染后的5-8F細胞侵襲能力明顯增強（P＜0.05），而SiNeg組細胞與Control細胞侵襲能力無明顯差別（P＞0.05）。
　　結論：SHP-1表達降低促進鼻咽癌細胞生長，細胞周期阻滯在G2/M期，侵襲能力增強。
　　第三部分SHP-1上調對鼻咽癌細胞生物學行為的影響及機制探討
　　目的：SHP-1過表達慢病毒載體感染低表達S

6、HP-1的CNE-2細胞，探討SHP-1上調對鼻咽癌細胞生物學行為的影響及其機制。
　　方法：SHP-1過表達慢病毒載體感染低表達的CNE-2細胞，通過PCR、Western-blot檢測感染前后細胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表達情況，MTT檢測感染前后細胞增殖情況，流式細胞儀檢測感染前后細胞凋亡及周期情況，Transwell侵襲小室模型測定細胞體外侵襲能力，Western檢測 SHP-1下游基因磷酸化的stat3的表達情況

7、。
　　結果：SHP-1過表達慢病毒載體感染低表達SHP-1的CNE-2細胞，PCR、Western-blot檢測感染后的細胞SHP-1表達明顯升高（P＜0.05），MTT檢測感染后CNE-2細胞細胞增殖受到抑制（P＜0.05）；流式細胞儀檢測三組細胞凋亡率無明顯變化，差別不具有統(tǒng)計學意義；流式細胞儀檢測感染后細胞G1期明顯減少（P＜0.05），S期明顯增多（P＜0.05），G2/M期變化不明顯（P＞0.05），細胞周期阻滯在S期

8、；Transwell侵襲小室檢測感染后CNE-2細胞的侵襲能力減弱（P＜0.05），而NC組細胞與Control細胞侵襲能力無明顯差別（P＞0.05）。為探討SHP-1影響鼻咽癌細胞生物學行為的機制，選取高表達SHP-1的感染后的CNE-2細胞，其p-stat3表達水平相比NC組細胞與Control細胞明顯下降（P＜0.05），這可能與SHP-1使p-stat3去磷酸化有關，進而抑制stat3通路引起細胞一系列上述生物學變化。