T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物的研制與評價.pdf

1、目的：為了保證T淋巴細(xì)胞亞群分析結(jié)果的可比性和可靠性，各臨床實(shí)驗(yàn)室必須開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加室間質(zhì)量評價活動。這些質(zhì)量保證措施的開展均需要合格的T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物，但是目前無國產(chǎn)的T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物，質(zhì)控物的提供主要依賴于國外生產(chǎn)商(如Beckman Coulter公司、BD公司)，進(jìn)口質(zhì)控物價格昂貴、購買周期長，給各臨床實(shí)驗(yàn)室和室間質(zhì)量評價組織機(jī)構(gòu)的應(yīng)用帶來較大困難。為此，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心參考大量國內(nèi)外文獻(xiàn)研制

2、了T淋巴細(xì)胞亞群分析的全血質(zhì)控物。 方法：首先在研制T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物的過程中，對多種影響因素進(jìn)行了研究和分析，選擇最佳方案，制備了批號分別為20081027、20081111和20090402的T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物。依據(jù)CNAS—GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》及ISO Guide35《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計(jì)原理》，每個批號隨機(jī)抽取10支樣本，每支樣本按照隨機(jī)順序重復(fù)檢測2次，

3、對三個批號的自制質(zhì)控物CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴細(xì)胞百分比三個指標(biāo)的均勻性進(jìn)行評價，對檢測結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析并計(jì)算均勻性的不確定度；按照不同的時間間隔隨機(jī)抽取有足夠代表性的樣本，對20081027和20081111批號自制質(zhì)控物的三個指標(biāo)的穩(wěn)定性進(jìn)行評價，包括不同儲存溫度對質(zhì)控物檢測結(jié)果的影響、開蓋穩(wěn)定性及長期穩(wěn)定性的評價，對檢測結(jié)果進(jìn)行一元線性回歸分析并計(jì)算長期穩(wěn)定性的不確定度；同時平行檢測進(jìn)口質(zhì)控物作為對照

4、。使用型號為Coulter—EPICS XL、BD—FACSCaliber的流式細(xì)胞儀各2臺分別檢測批號為20081027和20081111的自制質(zhì)控物，并使用型號為Coulter—EPICSXL、Coulter—Cytomics FC500、BD—FACSCaliber、BD—FACSCanto的流式細(xì)胞儀各1臺分別檢測批號為20090402的自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物，以觀察自制質(zhì)控物不同型號流式細(xì)胞儀的適用性；使用批號為2008102

5、7和20081111的自制質(zhì)控物與進(jìn)口質(zhì)控物同時試用于Coulter—EPICS XL機(jī)型流式細(xì)胞儀的室內(nèi)質(zhì)量控制；并發(fā)放批號為20081027和20081111的自制質(zhì)控物(編號為200806、200807)進(jìn)行室間質(zhì)量評價調(diào)查，將調(diào)查結(jié)果與進(jìn)口質(zhì)控物(編號為200801～200805)進(jìn)行分析比較，了解自制質(zhì)控物用于室間質(zhì)量評價的可行性。 結(jié)果：①選取抗凝新鮮人血為原料，采用溶血劑提取白細(xì)胞后，按照一定的固定條件分別固定紅細(xì)

6、胞及白細(xì)胞，用保養(yǎng)液保存固定處理后的紅、白細(xì)胞制得全血質(zhì)控物。②質(zhì)控物均勻性結(jié)果顯示，樣品內(nèi)和樣品間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；20081027、20081111和20090402批號自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物三個指標(biāo)均勻性檢測結(jié)果的變異系數(shù)(CV)變化范圍分別為1.51％～1.93％、0.60％～1.13％、0.58％～1.20％、0.74％～1.58％，均小于流式細(xì)胞儀說明書規(guī)定的熒光分辨率的CV值(CV≤2.00％)。20081

7、027、20081111和20090402批號自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物三個指標(biāo)均勻性的不確定度范圍分別為0.189％～0.318％、0.184％～0.280％、0.200％～0.302％、0.209％～0.284％，均小于方法重復(fù)性測量的不確定度。③室溫放置15天20081027和20081111批號自制質(zhì)控物三個指標(biāo)的測定結(jié)果與2℃～8℃放置的自制質(zhì)控物測定結(jié)果的比值變化范圍分別為93.79％～104.45％、94.03％～103.91

8、％；37℃下放置15天20081027和20081111批號自制質(zhì)控物三個指標(biāo)的測定結(jié)果與2℃～8℃放置的自制質(zhì)控物測定結(jié)果的比值變化范圍分別為32.17％～103.63％、14.20％～100.20％。20081027和20081111批號自制質(zhì)控物三個指標(biāo)開蓋后不同時間的檢測結(jié)果與第1天檢測結(jié)果的絕對偏差范圍分別為-0.13％～1.44％、0～2.40％，一元線性回歸的方差分析結(jié)果顯示P值均大于0.05，表明開蓋后14天內(nèi)隨著開蓋時

9、間的延長檢測結(jié)果無趨勢變化。19周內(nèi)的長期穩(wěn)定性評價結(jié)果顯示自制質(zhì)控物的三個指標(biāo)隨著保存時間均無線性趨勢變化(P>0.05)；20081027和20081111批號自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物三個指標(biāo)長期穩(wěn)定性的不確定度范圍分別為0.470％～1.114％、0.338％～0.798％、0.473％～1.266％，其中僅20081027批號自制質(zhì)控物CD3+CD4+淋巴細(xì)胞百分比長期穩(wěn)定性的不確定度略大于進(jìn)口質(zhì)控物，其余指標(biāo)均小于進(jìn)口質(zhì)控物，且

10、均小于方法重復(fù)性測量的不確定度。④自制質(zhì)控物在四種型號流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測，圖形顯示均可準(zhǔn)確設(shè)定淋巴細(xì)胞群，各陽性細(xì)胞群與陰性細(xì)胞群分離較好。20081027和20081111批號自制質(zhì)控物三個指標(biāo)在Coulter—EPICS XL、BD—FACSCaliber機(jī)型儀器間檢測結(jié)果的最大絕對偏差范圍分別為1.88％～3.18％、0.67％～0.99％。20090402批號自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物三個指標(biāo)在Coulter—EPICS XL、C

11、oulter—Cytomics FC500、BD—FACSCaliber、BD—FACSCanto機(jī)型儀器間檢測結(jié)果的最大絕對偏差范圍分別為3.84％～10.45％、3.17％～6.99％。⑤20081027和20081111批號自制質(zhì)控物及進(jìn)口質(zhì)控物每次室內(nèi)質(zhì)量控制檢測結(jié)果都在均值±3s范圍之內(nèi)，可認(rèn)為自制質(zhì)控物適用于Coulter—EPICS XL機(jī)型流式細(xì)胞儀進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。⑥室間質(zhì)量評價調(diào)查結(jié)果顯示，在BD公司儀器組，自制質(zhì)控

12、物與進(jìn)口質(zhì)控物的各指標(biāo)變異系數(shù)(CV)范圍分別為：2.94％～8.17％、2.84％～6.89％；在Beckman Coulter公司儀器組，自制質(zhì)控物與進(jìn)口質(zhì)控物的各指標(biāo)CV范圍分別為：3.07％～14.25％、1.84％～5.14％。 結(jié)論：研制的T淋巴細(xì)胞亞群分析全血質(zhì)控物均勻性良好。室溫放置15天對自制質(zhì)控物的影響較小，而37℃條件下放置時不穩(wěn)定：開蓋后2℃～8℃保存14天的檢測結(jié)果穩(wěn)定；2℃～8℃條件下保存19周內(nèi)穩(wěn)定