炎性肌病外周血淋巴細胞亞群的臨床研究及T淋巴細胞致病機制的初步探討.pdf

1、[目的]
　　 特發(fā)性炎性肌病(IIM)是一種病因和發(fā)病機制均未十分清楚的系統(tǒng)性自身免疫病，臨床上以多發(fā)性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)最常見。眾多研究提示免疫反應(yīng)的異?？赡苁荌IM發(fā)生、發(fā)展的中心環(huán)節(jié)，研究淋巴細胞表型和功能的異常對深入了解IIM的發(fā)病機制有重要意義。同時，既往研究證實IIM疾病活動性與外周淋巴細胞亞群存在一定關(guān)系。本研究主要分為兩個部分：第一部分探討外周血淋巴細胞亞群異常在PM和DM中的臨床意義，以及檢測外周血

2、淋巴細胞亞群在IIM中的臨床應(yīng)用價值；第二部分是研究IIM患者外周血T淋巴細胞自噬現(xiàn)象的異常，希望可以為IIM發(fā)病機制的理論研究提供一些線索。
　　 [方法]
　　 第一部分：
　　 是用流式細胞儀檢測89例PM/DM患者外周血淋巴細胞標(biāo)記分子的表達情況，比較初治患者及病情緩解患者以及部分患者自身治療前后外周血淋巴細胞亞群的區(qū)別，并通過多因素回歸分析分析淋巴細胞亞群變化與疾病臨床特點之間的關(guān)系。
　　 第

3、二部分：
　　 用免疫磁珠法分離10例DM患者和9例健康對照外周血T淋巴細胞，部分樣本直接經(jīng)免疫印跡法檢測自噬蛋白LC3和Beclin1的表達，并在透射電鏡和熒光顯微鏡下觀察細胞自噬現(xiàn)象；部份樣本經(jīng)過培養(yǎng)刺激之后檢測自噬蛋白的表達。最后使用不同濃度的TRAIL或TNFα刺激人Jurkat T細胞，免疫印跡法、流式細胞術(shù)及CCK-8法分別檢測細胞自噬蛋白的表達、凋亡情況和增殖活性。
　　 [結(jié)果]
　　 第一部分：

4、
　　 流式細胞儀檢測表明初治并處于活動期的DM患者外周血CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+細胞計數(shù)(分別為848.7±446.6,534.8±279.8和257.2±157.9 cell/mm3)明顯低于DM非活動期患者（1632.4±622.5，1041.8±558.2和562.5±376.2 cell/mm3）和健康對照（1376.3±389.7，834.4±278.6和457.9±170.4cell/mm3）（

5、F=12.901，8.257，7.084;P值均＜0.05）。6例患者經(jīng)過治療后病情均有不同程度的緩解，隨訪檢測了外周血淋巴細胞亞群，其中CD3+和CD3+CD4+細胞計數(shù)在治療前分別為514.0±412.1 cell/mm3和255.0±127.0 cell/mm3，治療后升高為833.5±470.5 cell/mm3和449.2±146.0 cell/mm3，治療前后比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.714和-3.665;P值均＜0

6、.05）。多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，PM/DM患者肌炎活動視覺模擬評估工具．疾病總活動度評分是患者外周血CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+細胞計數(shù)減低的獨立影響因素（b=0.211，0.344，0.289;P值均＜0.05）；合并間質(zhì)性肺疾病(ILD)是CD3+細胞計數(shù)減低及CD3+CD4+細胞百分比減低的獨立影響因素（b=0.928，1.974;P值均＜0.05）。另外Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，CD3+CD8+

7、細胞計數(shù)是PM/DM死亡的獨立危險因素(b=-0.011，OR=0.989;P＜0.05)。
　　 第二部分：
　　 透射電鏡下可以觀察到DM患者外周血T細胞典型的自噬體和自噬溶酶體結(jié)構(gòu)形成。未發(fā)現(xiàn)健康人及DM患者外周血T細胞有明顯自噬標(biāo)記蛋白LC3的表達，而Beclin1蛋白表達在健康人及DM患者之間比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)過氯喹培養(yǎng)刺激后，兩組實驗中每組DM患者外周血T淋巴細胞LC3蛋白表達均高于健康

8、對照。人Jurkat T細胞內(nèi)LC3蛋白的表達隨TNFα刺激濃度的增加沒有明顯變化，但隨著TRAIL濃度增加下調(diào)。TRAIL及TNFα均可引起JurkatT細胞發(fā)生凋亡的比例增加并抑制細胞增殖活性，該作用隨著培養(yǎng)刺激濃度的增加而增強。
　　 [結(jié)論]
　　 第一部分：
　　 外周血T淋巴細胞亞群在PM/DM疾病活動期明顯異常，并且隨著治療后病情緩解而趨于恢復(fù)，可以作為評價PM/DM病情活動的參考指標(biāo)之一；PM/D

9、M合并ILD可引起T細胞計數(shù)和CD4+T細胞百分比減低，對臨床綜合評估IIM肺臟受累可能有重要意義；CD8+T淋巴細胞計數(shù)明顯降低的患者死亡危險將增加，對評估PM/DM預(yù)后亦有指導(dǎo)意義。
　　 第二部分：
　　 DM患者外周血T淋巴細胞存在自噬現(xiàn)象，DM患者外周血T淋巴細胞自噬的情況可能不同于健康人；不同細胞因子，如TRAIL及TNFα，可能對人Jurkat T細胞自噬具有不同的調(diào)節(jié)作用。這些發(fā)現(xiàn)為IIM發(fā)病機制的研究提