網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物的研制與評價.pdf

1、目的：為了保證網(wǎng)織紅細胞計數(shù)檢測結果的可靠性和可比性，臨床實驗室要開展室內質量控制，并參加室間質量評價活動。這些質量保證措施的開展均需要合格的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物，但是目前無國產(chǎn)的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物，質控物的提供主要依賴于國外生產(chǎn)商(比如Sysme公司的e—CHECK等)，進口網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物價格昂貴，購買周期長，給臨床實驗室和室間質量評價組織機構的應用帶來很大困難。為此，衛(wèi)生部臨床檢驗中心參考國內外文獻，以豬血為原料研制了網(wǎng)織紅

2、細胞計數(shù)質控物。 方法：研制過程中，對多種影響因素進行了分析和研究，選擇最佳制備方案，制備出以豬血為原料的批號分別為2008112501、2008112502、2009032601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物。依據(jù)CNAS—GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》及ISO Guide35《標準物質/標準樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計原理》，對自制

3、質控物進行均勻性和穩(wěn)定性評價。從各批號自制質控物中隨機抽取出足夠數(shù)量的樣本，每支樣本重復檢測兩次，對檢測結果進行單因素方差分析并計算均勻性的不確定度，同時檢測進口質控物進行比較，因為進口質控物購買不便，選取兩支進口質控物分別連續(xù)檢測9次，將所得結果與自制質控物均勻性檢測結果進行比較；將按照隨機順序抽取的質控物分別放置于冷藏條件(2～8℃)、室溫條件(18～25℃)、37℃條件，按照不同的時間間隔對質控物進行檢測，觀察不同放置溫度對質控物

4、檢測結果的影響；將質控物開瓶檢測后重新放置于冷藏條件(2～8℃)，按照不同的時間間隔對質控物進行檢測，觀察質控物的開蓋穩(wěn)定性；將質控物放置于冷藏條件(2～8℃)，按照不同時間間隔隨機抽取質控物進行檢測，用一元線性回歸分析評價質控物的長期穩(wěn)定性，并對穩(wěn)定性的不確定度進行計算，同時將自制質控物穩(wěn)定性檢測數(shù)據(jù)與進口質控物室內質控數(shù)據(jù)進行比較；選用Sysmex XE2100，Sysmex SE9500，Coulter LH750，Coulter

5、 HmX，Bayer AVDIA120型號的血液分析儀對自制網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物檢測以觀察質控物是否適用于不同型號儀器；使用手工法對自制質控物進行煌焦油藍染色后鏡檢計數(shù)，觀察質控物是否適用于手工法檢測；將自制質控物試用于室內質量控制，與進口質控物同時在Sysmex XE2100上進行檢測，將所得結果進行比較。 結果：①篩選方案，制備了以豬血為原料的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物；②自制2008112501、2008112502、20090

6、32601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605批號質控物網(wǎng)織紅細胞百分比檢測結果的變異系數(shù)(CV)分別為4.2％、5.9、8.1％、5.2％、6.3％、3.3％、7％，進口82590801、82590803批號網(wǎng)織紅細胞計數(shù)百分比檢測結果的變異系數(shù)為2.9％、5.9％；對自制質控物均勻性檢測結果進行方差分析，樣品內和樣品間統(tǒng)計學分析差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；各批號質控物均勻性檢

7、測結果的不確定度分別為0.330％、0.039％、0.096％、0.113％、0.434％、0.268％、1.821％，各批號的均勻性檢測結果不確定度均小于或接近于各自批號的重復性測量的不確定度；⑨2009032601及2009032604批號的質控物室溫(18～25℃)放置相對于冷藏(2～8℃)放置15天檢測結果的最大偏差分別為5.81％、2.72％，可以認為室溫下放置15天對質控物檢測結果無影響；質控物在37℃放置后，下層細胞凝結成

8、塊，不易混勻，表明質控物不宜高溫放置；④2008112501、2008112502批號質控物14天開瓶穩(wěn)定性檢測結果的偏差分布范圍為—5.0％～0、—12.3％～0，對其進行方差分析，P值均大于0.05，統(tǒng)計學上無顯著意義：⑤自制2008112501、2008112502批號質控物70天內的穩(wěn)定性檢測結果CV值分別為1.8％、2.3％，隨儲存時間不存在明顯趨勢變化(P>0.05)；82590801、82590803進口批號質控物49天內

9、的穩(wěn)定性檢測結果CV值分別為5.9％、6.4％，隨儲存時間不存在明顯趨勢變化(P>0.05)；當效期為70天時，2008112501、2008112502批號質控物長期穩(wěn)定性檢測結果的不確定度為0.066％、0.0297％，均小于各自批號重復性測量的不確定度。⑥不同批號自制質控物在Sysmex XE2100、SysmexSE9500、Coulter LH750、Bayer AVDIA120上檢測結果的Cv值范圍分別為3.3％～8.1％、

10、5.3％～11.6％、9.2％～9.7％、3.9～8.9％，在Coulter HmX型號儀器上檢測結果重復性很差，CV值為93.7％。⑦不同批號自制質控物使用手工法對網(wǎng)織紅細胞計數(shù)百分比進行檢測，CV值分別為25％、21.8％、16.9％、13.1％、10.4％。⑨2009032601、2009032604批號自制質控物室內質量控制檢測結果的cv值分別為2.7％、3.3％，90610801、90610802、90610803批號的進口質

11、控物室內質量控制檢測結果的CV值分別為7.1％、4.7％、6.4％，自制質控物與進口質控物每日檢測結果都在均值±3SD范圍之內?？梢哉J為自制的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物適用于Sysmex XE2100作室內質控。 結論：研制的網(wǎng)織紅細胞計數(shù)質控物均勻性良好；在室溫下放置15天可保持穩(wěn)定，而37℃放置不穩(wěn)定；14天內的開瓶穩(wěn)定性良好；在冷藏條件下放置70天可保持穩(wěn)定；可用于Sysmex XE2100，Sysmex SE9500，Coul

12、ter LH750，BayerAVDIA120型號血液分析儀進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的檢測，不適用于Coulter HmX型號血液分析儀，考慮可能與Coulter HmX進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)檢測為半自動檢測，需要預先對質控物進行手工染色有關，因為全國范圍內采用Coulter HmX型號血液分析儀進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)檢測的醫(yī)院只有5家，考慮對將來室間質評活動的開展影響不大；手工法計數(shù)結果的CV值較大，考慮與手工法方法本身重復性不佳，計數(shù)細胞數(shù)目較少