不同類型清熱中藥的抑菌作用特點比較及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：研究不同類型清熱中藥的抑菌作用特點的異同，進一步獲得清熱中藥的分類的現(xiàn)代數(shù)據(jù)，并開展清熱中藥作為抗生素增效劑和益生菌促生長因子的應(yīng)用開發(fā)，旨在為清熱藥的應(yīng)用提供實驗參考。
　　方法：⑴以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、嗜酸乳桿菌為實驗菌株，采用比濁法測定不同類型清熱中藥的對3株細菌體外的增殖率大小。⑵采用比濁法測定不同類型清熱中藥對大腸桿桿菌與金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）。分別繪制清熱解毒中藥與清熱燥濕中藥對金黃色葡萄球

2、菌的生長曲線及分別建立了清熱解毒中藥與清熱燥濕中藥對金黃色葡萄球菌生長曲線的一級、二級生長模型。⑶采用棋盤法測定清熱復(fù)方與頭孢拉定、左氧氟沙星、阿莫西林、慶大霉素聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的抑菌作用。利用細胞膜滲透性、糖代謝、磷代謝、AKP的含量測定、SDS-PAGE電泳等方法，來闡述清熱復(fù)方的抑菌機理。⑷以清熱中藥蒲公英作為促生長因子，采用正交法優(yōu)化嗜酸乳桿菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
　　結(jié)果：①清熱燥濕中藥黃芩、黃連、黃柏抑制金黃色葡萄球菌的

3、增殖，與對照組比較，有顯著性差異（P＜0.05）。清熱燥濕中藥黃連、黃柏、黃芩能抑制大腸桿菌的增殖，與對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。清熱解毒中藥穿心蓮、連翹、板藍根、菊花、魚腥草、敗醬草、金銀花對大腸桿菌無增殖作用，與對照組比較，無顯著性差異（P＞0.05）。清熱燥濕中藥黃連、黃芩、黃柏對嗜酸乳桿菌有明顯抑制作用。其中黃連、黃芩、黃柏與對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。清熱解毒中藥蒲公英、金銀花、穿心蓮、魚腥草、

4、敗醬草、板藍根、連翹對嗜酸乳桿菌有明顯的增殖作用，與對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。②清熱燥濕中藥黃芩、黃連對金黃色葡萄球菌具有較強的抑菌作用（≤7.81 mg/mL），清熱燥濕中藥黃柏與清熱解毒中藥金銀花、連翹、蒲公英、板藍根、穿心蓮、敗醬草對金黃色葡萄球菌具有中等抑菌作用（15.63~62.5 mg/mL）。清熱解毒中藥黃芩、黃連對大腸桿菌具有較強抑菌作用（≤7.81 mg/mL）。在 Gompertz生長預(yù)測模型的基礎(chǔ)

5、上，建立了在7.81~125 mg/mL條件下金黃色葡萄球菌的μm與質(zhì)量濃度的有效二級模型。③清熱復(fù)方分別與頭孢拉定、阿莫西林、慶大霉素和左氧氟沙星聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的FIC為0.125、1.00、0.531和0.531。清熱解毒復(fù)方液作用于菌體6 h后，給藥組的電導(dǎo)率比對照組增加了4.88％（P＜0.05）。清熱復(fù)方提取液孵育0~8 h，各實驗節(jié)點的吸光度差異均小于0.47%（P＞0.05）。清熱解毒復(fù)方與菌液作用0~10 h時，培

6、養(yǎng)液糖濃度與對照組的培養(yǎng)液中糖濃度隨作用時間一直降低。在0~12 h時，試驗組與對照組磷的濃度一直在降低。清熱復(fù)方液作用于菌體在0~6h胞外可檢測的磷酸酶含量明顯增加，且顯著高于對照組。清熱復(fù)方提取液反應(yīng)16 h后，實驗組的可溶性蛋白含量比對照組有明顯變化。95000Da處，與對照組相比清熱復(fù)方組明顯增加一條蛋白條帶；130000~95000Da之間，對照組比清熱復(fù)方組明顯消失了一條蛋白條帶。④采用正交實驗優(yōu)化嗜酸乳的增菌培養(yǎng)基，得出培

7、養(yǎng)基優(yōu)化的最優(yōu)組合為：硫酸鎂0.58g/L，硫酸錳0.25g/L，酵浸母粉20g/L，磷酸氫二鉀2g/L，檸檬酸氫二銨2 g/L，番茄汁150ml/L，乙酸鈉15g/L，葡萄糖2 g/L，蒲公英粉1.0g/L，pH6.4，加入蒸餾水1000 mL。
　　結(jié)論：⑴革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌對清熱中藥敏感度高。⑵清熱燥濕藥主要影響金黃色葡萄球菌的最大比生長速率，清熱解毒藥主要影響金黃色葡萄球菌的滯后期λ。⑶清熱復(fù)方與頭孢拉定、慶大霉素