革蘭陰性桿菌β-內(nèi)酰胺類耐藥機(jī)制研究.pdf

1、β-內(nèi)酰胺類抗生素療效好而毒性小，是目前治療感染性疾病的重要藥物。該類藥物包括青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類等。但隨之而來(lái)細(xì)菌也很快就產(chǎn)生耐藥性。近年來(lái)，控制由多重耐藥革蘭陰性桿菌引起的醫(yī)院獲得性感染一直是各國(guó)醫(yī)學(xué)界所面臨的重要問(wèn)題。 產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-spectrum a-lactamases ESBLs)是導(dǎo)致腸桿菌科細(xì)菌對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的最常見(jiàn)機(jī)制。各地ESBLs的流行情況差異很大，各個(gè)國(guó)家和

2、地區(qū)產(chǎn)ESBLs菌株的發(fā)生率亦明顯不同。 銅綠假單胞菌是引起院內(nèi)感染最常見(jiàn)的革蘭陰性桿菌菌種之一。由于它具有先天的和后天獲得的耐藥性，常對(duì)多種不同類型的抗菌藥物高度耐藥，一旦感染，治療非常棘手，死亡率很高。 探索耐藥機(jī)制開發(fā)新的抗菌藥物是人類在與感染性疾病抗?fàn)庍^(guò)程中需要持續(xù)不斷研究的重要課題。 本研究首先分析了常規(guī)方法篩選產(chǎn)ESBLs的181株腸桿菌科細(xì)菌和75株銅綠假單胞菌對(duì)常用的10種抗菌藥物的敏感性，并通過(guò)

3、PCR-測(cè)序法檢測(cè)了這些菌株中ESBLs的基因型分布。結(jié)果顯示，產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌對(duì)頭孢類和喹諾酮類的耐藥性均較高；含酶抑制劑的β-內(nèi)酰胺類敏感率較高：對(duì)碳青霉烯類全部敏感。銅綠假單胞菌對(duì)所用10種抗菌藥物的耐藥率都相當(dāng)高。最有效的藥物是美羅培南，但其抑菌率只有69.7％。 181株腸桿菌科細(xì)菌全部檢出ESBLs基因，經(jīng)測(cè)序證實(shí)以tem-1和ctx-m-3型為主，其中tem和ctx-m同時(shí)陽(yáng)性的有82株，有4株菌tem基因

4、陽(yáng)性同時(shí)還檢出oxa-1群基因，其它基因型均未檢出。75株銅綠假單胞菌中40株檢測(cè)到ESBLs基因。tem-1是最常見(jiàn)的，有20株菌陽(yáng)性：其次是oxa-10，13株陽(yáng)性。沒(méi)有檢測(cè)到shv、ctx-m和ges基因。 銅綠假單胞菌中ESBLs并非最重要的β-內(nèi)酰胺酶，所以對(duì)75株銅綠假單胞菌，我們還采用用頭孢西丁敏感試驗(yàn)、三聯(lián)紙片試驗(yàn)和改良三維試驗(yàn)檢測(cè)AmpC酶：用抑制劑增效試驗(yàn)和雙紙片協(xié)同試驗(yàn)檢測(cè)金屬β-內(nèi)酰胺酶。結(jié)果AmpC酶陽(yáng)

5、性的有40株，金屬酶陽(yáng)性為38株。與ESBLs綜合來(lái)看，75株菌中有11株菌同時(shí)檢測(cè)到ESBLs、AmpC和MBLS，33株同時(shí)兩類酶陽(yáng)性。 除β-內(nèi)酰胺酶外，外膜通透性降低與多藥外排泵的產(chǎn)生在銅綠假單胞菌碳青霉烯類耐藥中有重要的作用。故對(duì)30株碳青霉烯類耐藥株用定量RT-PCR檢測(cè)其OprD和四種多藥耐藥泵基因的表達(dá)情況。結(jié)果30株碳青霉烯類耐藥的銅綠假單胞菌中14株有耐藥泵基因表達(dá)異常，12株OprD表達(dá)異常。結(jié)合第一部分中

6、p.內(nèi)酰胺酶的分析，一株細(xì)菌中可同時(shí)存在耐藥泵、OprD基因表達(dá)異常及產(chǎn)多種p.內(nèi)酰胺酶，由此可見(jiàn)銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制非常復(fù)雜。這些不同的耐藥機(jī)制間相互作用、相互影響導(dǎo)致產(chǎn)生不同的耐藥表型。與實(shí)驗(yàn)菌株相比，臨床株的耐藥機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜。一些耐藥機(jī)制在實(shí)驗(yàn)株中表現(xiàn)出來(lái)的耐藥表型并不一定在臨床株中存在。比如實(shí)驗(yàn)株中MexCD高表達(dá)導(dǎo)致對(duì)亞胺培南的高度敏感，而本研究中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)此種現(xiàn)象。通常對(duì)產(chǎn)AmpC酶的菌株主張選用頭孢吡肟治療，但本研究中8

7、株只產(chǎn)AmpC酶的菌株中就有4株都對(duì)頭孢吡肟耐藥。 綜上分析，盡管產(chǎn)ESBLs的腸桿菌科細(xì)菌對(duì)三、四代頭孢菌素耐藥性強(qiáng)，但其對(duì)含酶抑制劑的藥物依然保持較高的敏感率，而且，全部菌株都對(duì)碳青霉烯類敏感。所以，對(duì)其感染我們依然有藥可用。但銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)象非常嚴(yán)重，美羅培南的抑菌率也只有69.7％。產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶是耐β-內(nèi)酰胺類藥物的主要機(jī)制之一；碳青霉烯類耐藥株中部分有泵基因或OprD的表達(dá)異常。一株細(xì)菌中可同時(shí)存在多種耐藥機(jī)制