版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、背景與目的:
中國細(xì)菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)(CHINET)從2005年到2013年連續(xù)八年對全國各地臨床分離菌株進(jìn)行耐藥性檢測,分析結(jié)果表明,革蘭陰性桿菌為我國大型教學(xué)醫(yī)院主要的臨床分離菌株(約占70%),分離率有升高趨勢,從2005年為66.9%至2010年的71.6%,在2013年升至73.0%。其中腸桿菌科耐碳青霉烯藥物比例從2005年0%~3%升至2013年的7%,非發(fā)酵菌耐碳青霉烯藥物比例從2005年30%升至2013年的60
2、%。革蘭陰性菌中最常見的菌株分別為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌。二十世紀(jì)八十年代以來,由于廣譜抗菌藥物的濫用,革蘭陰性桿菌的耐藥狀況日趨嚴(yán)重。基于碳青霉烯類藥物對革蘭陰性桿菌具有穩(wěn)定的抗菌效果,臨床將其作為對革蘭陰性桿菌感染治療的重要手段。然而,近年來,對碳青霉烯藥物耐藥細(xì)菌的報道越來越多。因此,加強對此類細(xì)菌耐藥性的研究、監(jiān)測、遏制耐碳青霉烯類藥物菌株的產(chǎn)生與傳播,成為微生物領(lǐng)域的研究熱點。
耐碳青霉
3、烯類藥物革蘭陰性桿菌常常為多重耐藥/泛耐藥菌株,攜帶并有效表達(dá)耐藥基因,是此類菌株產(chǎn)生耐藥的分子機制,產(chǎn)生水解酶,通道蛋白改變,外排泵過表達(dá),青霉素結(jié)合蛋白改變等,是細(xì)菌對藥物產(chǎn)生耐藥性的關(guān)鍵機制。目前用于治療此類菌株感染的抗菌藥物主要為β內(nèi)酰胺類藥物,包括青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類藥物等。菌株對這些藥物的耐藥常常涉及一種或多種機制。鑒于臨床治療實際需要及檢測試驗可操作性等原因,明確此類菌株的耐藥表型,是當(dāng)前研究的主要內(nèi)容之一。根
4、據(jù)體外藥物敏感試驗結(jié)果,分析臨床分離菌株對各類藥物的耐藥特征,可有效反映分離菌株耐藥性的地域性差異,對于指導(dǎo)當(dāng)?shù)嘏R床醫(yī)生合理抗菌治療具有重要的實踐價值。
對于碳青霉烯類藥物而言,產(chǎn)生碳青霉烯酶是細(xì)菌耐藥的主要機制。目前,國內(nèi)外針對此類菌株的研究,多著力于碳青霉烯酶在不同菌株中的分布差異,以及在不同地域的流行分布特征。根據(jù)Ambler分子結(jié)構(gòu)分類,可將碳青霉烯酶分為3組,分別為A、B、D三類酶,A類、D類為絲氨酸酶,B類為金屬b
5、eta內(nèi)酰胺酶。B類酶中又以NDM-1型酶最為常見,在世界多個國家和地區(qū)均有報道,并且blaNDM的變異基因正在逐漸發(fā)現(xiàn)并報道(包括NDM-1到NDM-14)。研究表明,亞型之間雖然僅有個別氨基酸的置換,但其耐藥性有所不同。此外,從生物信息學(xué)的角度來看,不同型別的碳青霉烯酶受到抗菌藥物長期作用,有著各自相對穩(wěn)定的進(jìn)化關(guān)系。明確本地區(qū)所流行碳青霉烯酶的種類,以及不同菌株中攜帶酶的類型差異,分析流行型別在進(jìn)化關(guān)系樹中的位置,預(yù)測其下一步可能
6、的突變進(jìn)化方向,對指導(dǎo)本地區(qū)抗感染治療,具有重要意義。
基于耐碳青霉烯革蘭陰性桿菌的廣泛耐藥活性,此類菌株在院內(nèi)感染中占據(jù)著重要地位,而院內(nèi)感染又是此類菌株擴散及其耐藥性在菌株間傳播的重要方式。因此,對臨床分離菌株進(jìn)行克隆株分型研究,明確是否存在耐碳青霉烯藥物菌株,以及該菌株是否有院內(nèi)感染流行趨勢,可為臨床經(jīng)驗治療提供合理指導(dǎo)外,對于院內(nèi)感染的防控亦具有重要價值。
為解決上述問題,我們設(shè)計了本課題,旨在通過檢測臨床分
7、離耐碳青霉烯革蘭陰性桿菌,分析其耐藥表型,探究碳青霉烯耐藥基因的存在與分布,明確是否有院內(nèi)感染的存在,為臨床抗感染治療及流行病學(xué)研究,提供可靠的實驗室依據(jù)。
方法:
?。?)菌株收集收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科細(xì)菌室2013年7月到2013年12月份間,臨床分離來自河南不同地區(qū)的不同標(biāo)本來源的耐亞胺培南/美羅培南非重復(fù)革蘭陰性桿菌121株,其中大腸埃希菌10株,肺炎克雷伯菌19株,銅綠假單胞菌30株和鮑曼不動桿菌62
8、株所有菌株均經(jīng)過Vitek2 Compact鑒定到種。
?。?)細(xì)菌耐藥性及流行病學(xué)分析采用WHOnet5.0分析軟件,對所有分離菌株流行分布特征及耐藥表型進(jìn)行統(tǒng)計分析。藥物敏感試驗質(zhì)控菌株采用大腸埃希菌ATCC25922。
?。?)全基因組DNA采用DNA提取試劑盒提取。嚴(yán)格按照說明書要求規(guī)范操作。
?。?)耐碳青霉烯菌株初篩首先用改良Hodge實驗和EDTA協(xié)同抑制實驗對碳青霉烯酶進(jìn)行表型篩選,改良Hodge
9、實驗以待測株和陽性對照株在抑菌圈與劃線交叉處有增強生長現(xiàn)象為篩選陽性。EDTA協(xié)同實驗以靠近EDTA紙片處有抑菌環(huán)擴大為陽性篩選。
?。?)耐碳青霉烯菌株確證對于初篩陽性菌株,提取全基因組DNA后,采用PCR技術(shù)對A類(KPC)、B類(NDM,VIM,SPM,IMP,GIM)和D類酶基因(OXA23,OXA24,OXA51,OXA58)擴增,并對擴增產(chǎn)物進(jìn)行測序分析,測序結(jié)果Blast比對明確型別。
?。?)分子進(jìn)化預(yù)測
10、分析NDM酶所有變異體結(jié)構(gòu)及氨基酸序列差異,使用軟件分析藥物正選擇位點并模擬變異體酶蛋白三維結(jié)構(gòu),進(jìn)行NDM變異體同源性分析。
(7)菌株分型研究采用RAPD-PCR方法對銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌進(jìn)行隨機引物擴增,依據(jù)擴增結(jié)果對菌株進(jìn)行同源性分析。
結(jié)果:
1.碳青霉烯酶檢出情況
檢出A類KPC陽性11株,其中肺炎克雷伯菌10株,大腸埃希菌1株,檢出B類NDM陽性7株,其中肺炎克雷伯菌3株,大腸
11、埃希菌4株,其中有兩株檢測出NDM-5(國內(nèi)僅兩例報道)。對銅綠假單胞菌的碳青霉烯酶基因擴增,結(jié)果均為陰性,鮑曼不動桿菌對D類酶基因擴增,60株鮑曼均為OXA23,OXA51陽性,其中一株鮑曼不動OXA24陽性,一株OXA58陽性。
2.金屬酶NDM變異體
本研究通過對 PCR陽性標(biāo)本的測序中發(fā)現(xiàn)了blaNDM-5,發(fā)現(xiàn)時國內(nèi)尚無報道,僅在國際上有幾例報道。blaNDM-5相比于blaNDM-1為88位與154位發(fā)生
12、氨基酸置換。
3.菌株分型情況
根據(jù)RAPD-PCR菌株分型技術(shù)聯(lián)合瓊脂糖凝膠電泳,將銅綠假單胞菌分為14型,鮑曼不動桿菌分為4型。
結(jié)論:
?。?)腸桿菌科碳青霉烯酶基因分離率高,占62%,產(chǎn)生碳青霉烯酶是腸桿菌科耐碳青霉烯藥物的主要機制。其中在兩株大腸埃希菌中發(fā)現(xiàn)blaNDM-1變異基因blaNDM-5,并且耐藥性不同。耐藥基因通過單個核苷酸的突變產(chǎn)生新的耐藥基因型。
?。?)在銅綠假單
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 耐碳青霉烯類革蘭陰性桿菌β內(nèi)酰胺酶研究.pdf
- 產(chǎn)碳青霉烯酶革蘭陰性桿菌的耐藥及傳播機制研究.pdf
- 耐碳青霉烯革蘭陰性桿菌分子流行病學(xué)及MALDI-TOF MS在碳青霉烯耐藥決定子快速檢測中的應(yīng)用研究.pdf
- 革蘭陰性菌中碳青霉烯酶基因分布及傳播特性研究.pdf
- 革蘭陰性超級細(xì)菌碳青霉烯酶基因和可移動耐藥元件結(jié)構(gòu)研究.pdf
- 非發(fā)酵革蘭陰性桿菌
- 多重耐藥革蘭陰性桿菌
- 革蘭陰性桿菌β-內(nèi)酰胺類耐藥機制研究.pdf
- 抗菌藥物合理使用材料革蘭陰性桿菌
- 革蘭陰性桿菌腦膜炎
- 耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動桿菌耐藥機制研究.pdf
- 耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌臨床株耐藥機制的研究.pdf
- 耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶及整合子研究.pdf
- 革蘭陰性桿菌的耐藥性研究
- 耐碳青霉烯腸桿菌科細(xì)菌臨床株耐藥機制的研究.pdf
- 革蘭陰性桿菌中整合子的研究.pdf
- 常見革蘭陰性桿菌對頭孢曲松耐藥機制的研究.pdf
- 住院患者糞便中耐碳青霉烯G-桿菌調(diào)查及耐藥機制研究.pdf
- 革蘭陰性球菌
- 耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌致病性研究.pdf
評論
0/150
提交評論