革蘭陰性桿菌CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因研究.pdf

1、目的:了解湖南地區(qū)中南大學(xué)湘雅醫(yī)院、湘雅二醫(yī)院、湘雅三醫(yī)院這三所附屬醫(yī)院中CTX-M型ESBLs在革蘭陰性桿菌的檢出率，確定其基因型，并對其流行病學(xué)方面進(jìn)行研究。 方法:收集2004年10月至2005年7月臨床標(biāo)本分離的254株多重耐藥革蘭陰性桿菌，按CLSI／NCCLS所推薦的方法進(jìn)行表型確證試驗(yàn)，采用多重PCR法對ESBLs表型陽性株進(jìn)行CTX-M酶基因型的檢測，用CTX-M組特異性引物對CTX-M基因整個開放閱讀框進(jìn)行擴(kuò)增

2、并對PCR產(chǎn)物測序，通過blast分析確定其基因分型。對證實(shí)攜帶有CTX-M基因的菌株進(jìn)一步作RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA)進(jìn)行菌株DNA的同源性分析。 結(jié)果:從254株臨床分離的多重耐藥革蘭陰性桿菌中共檢出ESBLs表型陽性菌153株，其中腸桿菌科細(xì)菌142株，非發(fā)酵菌11株。經(jīng)多重PCR擴(kuò)增，142株腸桿菌中109株攜帶CTX-M基因，11株非發(fā)酵菌均未攜帶CTX-M基因，CTX-M型ESBLs在ESBLs表型陽性的腸桿菌科

3、細(xì)菌中檢出率達(dá)76.8％(109／142)。特異性引物進(jìn)一步擴(kuò)增及測序結(jié)果顯示，攜帶CTX-M-1組基因有48株，攜帶CTX-M-9組基因48株，用CTX-M-l組和CTX-M-9組特異性引物擴(kuò)增均為陰性的13株。共檢出三種基因型，即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。從大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌和弗勞地枸櫞酸桿菌中檢出CTX-M-3；從斯氏普羅威登菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌中檢出CT

4、X-M-14；從大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌中檢出CTX-M-15。對50株CTX-M陽性菌株進(jìn)行RAPD分析，26株大腸埃希菌有12種RAPD類型，14株肺炎克雷伯菌有6種RAPD類型，10株陰溝腸桿菌有7種RAPD類型。結(jié)果顯示，RAPD類型呈高度多樣性。但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在同一所醫(yī)院有些菌株表現(xiàn)出相同的RAPD類型，甚至來自不同醫(yī)院的兩株菌表現(xiàn)出相同的RAPD類型。 結(jié)論: 1)國際上，本研究首次在斯氏普羅威登菌