大鼠原位肺移植手術(shù)流程的改良以及長(zhǎng)期觀察移植肺的功能.pdf

1、背景：
　　肺移植(Lung transplantation)是治療慢性阻塞性肺疾病，特發(fā)性肺纖維化，特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓等終末期肺部疾病的有效方法[1]。據(jù)國(guó)際心肺移植協(xié)會(huì)(TheInternational Society for Heart and Lung Transplantation，ISHLT)的統(tǒng)計(jì)，截止2013年6月30日，全世界范圍內(nèi)已完成3772例成人心肺聯(lián)合移植手術(shù)和47647例成人肺移植手術(shù)[2]。雖然近年來(lái)外

2、科技術(shù)，免疫抑制劑和抗感染藥物的使用方面有了很大的提高，但由于其特殊的解剖結(jié)構(gòu)和生理功能，肺移植術(shù)后排斥反應(yīng)以及感染的發(fā)生率顯著高于其他實(shí)體臟器器官移植患者。因此，肺移植術(shù)后患者的長(zhǎng)期生存率明顯比其它實(shí)體臟器器官移植患者低。
　　肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)是制約肺移植術(shù)后患者長(zhǎng)期生存率的主要原因，閉塞性細(xì)支氣管炎(Bronchiolitis obliterans，BO)是肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)的主要表現(xiàn)形式。BO病理表現(xiàn)為細(xì)支氣管上皮

3、損傷引起的間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)終末呼吸道并引起纖維增生致管腔狹窄，閉塞性細(xì)支氣管炎綜合征(Bronchiolitis obliteranssyndrome，BOS)是BO的臨床表述，表現(xiàn)為肺功能進(jìn)行性不可逆的下降[3].目前，BOS的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，而且缺乏有效的治療措施。
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型在肺移植以及肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)的研究中起著重要的推動(dòng)作用。目前，大鼠原位肺移植模型已用于肺移植術(shù)后缺血再-灌注損傷和急性排斥反應(yīng)的研究，而肺

4、移植術(shù)后慢性排異反應(yīng)的研究大多采用氣管原位/異位移植模型，以復(fù)制BOS的典型病理表現(xiàn)。大鼠氣管原位/異位模型操作難度低，可重復(fù)性高，但是，氣管原位/異位移植模型不符合正常的生理解剖特點(diǎn)，臨床相關(guān)性低，因此，對(duì)于利用氣管原位/異位移植模型研究肺移植術(shù)后BOS的可行性仍有很多爭(zhēng)議。穩(wěn)定、可重復(fù)、長(zhǎng)期存活的肺移植模型是建立原位肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)模型的關(guān)鍵。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于大鼠原位左肺移植模型的研究多為短期實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停g(shù)后長(zhǎng)期觀察移植肺的功能的

5、報(bào)道較少。此外，大鼠原位肺移植手術(shù)的操作難度大以及術(shù)后受體大鼠的長(zhǎng)期生存率低，肺不張的發(fā)生率高等因素也限制了肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)的研究。因此，簡(jiǎn)化大鼠原位肺移植模型的手術(shù)流程，建立一個(gè)穩(wěn)定、可復(fù)制、長(zhǎng)期存活的大鼠原位肺移植模型有利于肺移植以及肺移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)的研究。
　　目的：
　　對(duì)大鼠原位肺移植手術(shù)的流程進(jìn)行改良并簡(jiǎn)化吻合過(guò)程，以提高手術(shù)成功率以及受體存活率，長(zhǎng)期觀察受體大鼠移植肺的功能，為肺移植相關(guān)的研究以及肺

6、移植術(shù)后慢性排斥反應(yīng)的研究提供穩(wěn)定、可重復(fù)、長(zhǎng)期存活的大鼠原位左肺移植模型的方法。
　　方法：
　　對(duì)大鼠原位肺移植手術(shù)流程進(jìn)行改良，簡(jiǎn)化供體和受體相應(yīng)管腔的吻合難度。用改良的手術(shù)流程以套管法（Cuff technique）分別吻合左肺靜脈、左肺動(dòng)脈、左肺支氣管，建立大鼠原位左肺移植模型。記錄手術(shù)成功率，手術(shù)時(shí)間，移植肺熱缺血時(shí)間，術(shù)后受體存活率以及移植肺的功能，分別于肺移植術(shù)后30d、60d、90d拍攝胸部CT，評(píng)估大鼠移

7、植肺的形態(tài)和膨脹情況;并且分別于30d、60d、90d處死一組受體(=5)，解剖觀察移植肺大體的膨脹情況以及形狀，行蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin，HE)染色、Masson染色觀察移植肺的病理表現(xiàn)。正常Lewis大鼠作為對(duì)照組。
　　結(jié)果：
　　本實(shí)驗(yàn)均在單人目視下完成操作。大鼠原位肺移植手術(shù)流程改良后總手術(shù)成功率為93.3％(28/30);供體手術(shù)時(shí)間為35±7min;熱缺血時(shí)間為8±3min;受體手術(shù)時(shí)

8、間為42±12min;短期存活率（≥1天）為100％(28/28);長(zhǎng)期存活率(≥30d)為78.6％(22/28)，存活最長(zhǎng)的模型存活時(shí)間超過(guò)180天。術(shù)后30d、60d、90d拍攝胸部CT顯示術(shù)后長(zhǎng)期存活的受體移植肺的形狀基本正常，膨脹肺功能良好，有少量的實(shí)變。解剖顯示移植肺的膨脹，顏色均與受體健側(cè)右肺無(wú)明顯差別。HE染色和Masson染色均提示肺實(shí)質(zhì)和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)基本正常，有少量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及實(shí)變。
　　結(jié)論：
　　用