熱休克蛋白90α基因多態(tài)性與肺癌危險度的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、肺癌是當(dāng)今世界對人類健康危害最大的惡性腫瘤之一。其發(fā)病率和死亡率不僅在逐年上升而且在許多發(fā)達國家以及我國部分城市已躍居惡性腫瘤之首，如何降低肺癌的發(fā)病率和死亡率成為公共衛(wèi)生和臨床醫(yī)學(xué)必須解決的一個重大問題。肺癌是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所致的一種多基因復(fù)雜疾病。各種研究表明，熱休克蛋白90(heat shock protein 90，Hsp90)通過影響腫瘤細(xì)胞的凋亡和增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能在肺癌的發(fā)生和發(fā)展的過程中起

2、著非常重要的作用。
　　 人類的Hsp90這種分子伴侶蛋白是由兩種獨立的基因編碼產(chǎn)物組成的，Hsp90α和Hsp90b。Hsp90α是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)，在生物進化過程中高度保守。腫瘤細(xì)胞中Hsp90α的表達明顯比正常細(xì)胞高,在病毒轉(zhuǎn)化和化學(xué)誘導(dǎo)的腫瘤中看到Hsp90α有明顯的上升趨勢。依賴于細(xì)胞狀態(tài)和細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能，Hsp90α能促進癌細(xì)胞的存活。而且，Hsp90α還能促進腫瘤的遷移和增殖以及和癌癥的不良預(yù)后密切相關(guān)。
　

3、　 蛋白質(zhì)由基因編碼，hsp90基因的改變可能引起Hsp90性質(zhì)和表達量的變化，從而參與肺癌的發(fā)生發(fā)展，但目前還沒有hsp90基因多態(tài)性與肺癌關(guān)系的研究。鑒于Hsp90α在腫瘤細(xì)胞中的表達增高以及Hsp90的抗凋亡反應(yīng)在肺癌的發(fā)病及進程中的作用，編碼Hsp90α的基因HSP90AA1的SNPs可能與肺癌發(fā)病有一定聯(lián)系。
　　 不同人種SNPs類型和頻率不同，NCBI數(shù)據(jù)庫中有40個HSP90AA1 SNPs，多數(shù)SNPs缺乏人

4、種及頻率數(shù)據(jù)。在中國漢族人群中進行HSP90AA1 SNPs與肺癌的關(guān)聯(lián)研究必須首先明確HSP90AA1 SNPs在中國漢族人群中的種類、頻率和分布規(guī)律。因此，本課題運用分片段擴增直接測序的方法，結(jié)合Taqman基因分型技術(shù)檢測HSP90AA1基因多態(tài)性，揭示了中國漢族人群HSP90AA1基因多態(tài)性分布規(guī)律；并采用病例-對照研究探討了HSP90AA1基因多態(tài)性在肺癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)聯(lián)和意義。
　　 第一部分、HSP90AA1基因多

5、態(tài)性在中國漢族人群中的分布
　　 本部分采用分片段擴增直接測序的方法檢測30名健康志愿者的HSP90AA1基因的5'側(cè)翼區(qū)、全部編碼區(qū)及外顯子與內(nèi)含子交界區(qū)，從而揭示HSP90AA1基因多態(tài)性在中國漢族人群中的頻率分布規(guī)律。
　　 結(jié)果顯示：1.在HSP90AA1基因中共發(fā)現(xiàn)10個頻率大于1%的SNPs，其中3個為新發(fā)現(xiàn)SNPs。3個新SNPs均位于啟動子區(qū)，最小等位基因頻率分別為0.2、0.1、0.15。7個已報道的S

6、NPs為rs8005905(t/a)、rs10873531(t/c)、rs4947(c/t)、rs3742429(t/c)、rs2298877(a/g)、rs2298878(c/t)、rs35997255(_/tg)。2.將測得的SNPs頻率與NCBI數(shù)據(jù)庫中的已知信息比較后發(fā)現(xiàn)中國人HSP90AA1 SNPs頻率與日本人近似，與歐美和非洲人差異顯著，而且位于內(nèi)含子的rs4947和位于3’端非翻譯區(qū)的rs35997255均只有歐洲人群和

7、非洲人群的信息而無中國和日本人群的信息。3.連鎖不平衡分析后發(fā)現(xiàn)：rs4947和rs3742429，rs2298877和rs35997255之間為完全連鎖不平衡(D′=1，r2=1)，其余位點之間存在很強的連鎖(D′>0.9，r2>0.9)，且6個位點處于一個單倍域。4.通過軟件計算結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs8005905可作為tagSNP，代表整個HSP90AA1基因的遺傳變異信息。
　　 第二部分、HSP90AA1基因多態(tài)性與肺癌的關(guān)聯(lián)

8、
　　 本部分采用病例－對照研究，應(yīng)用Taqman基因分型法研究HSP90AA1基因rs8005905位點在2個中國漢族人群中（上海人群：521名病例和467名對照；武漢人群：1152名病例和1152名對照）和的分布情況及它們在肺癌中作用。
　　 結(jié)果顯示：HSP90AA1基因rs8005905這個位點的基因型頻率和等位基因頻率分布在2個人群的病例組和對照組中差異無顯著性(P>0.05)。再分別按病理類型、性別、年齡（以

9、60歲劃分）、吸煙狀態(tài)、累計吸煙劑量（包年）進行分層分析，采用多元logistic回歸分析對兩組間年齡、性別、吸煙狀況、累計吸煙劑量等因素進行校正后，在2個人群中均未觀察到病例組和對照組的基因型頻率分布和肺癌患病風(fēng)險間的統(tǒng)計學(xué)意義。對武漢人群采用Cox回歸分析，校正了年齡、性別、吸煙、病理分型、TNM分期、手術(shù)史、化療和放療的影響后，HSP90AA1基因 rs8005905多態(tài)性對肺癌患者預(yù)后的影響也無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明r

10、s8005905多態(tài)性與上海地區(qū)，武漢地區(qū)的肺癌無關(guān)聯(lián)。
　　 本研究的創(chuàng)新之處在于：(1)對中國漢族人群HSP90AA1基因進行了再測序，發(fā)現(xiàn)了3個新SNPs，揭示了中國漢族人群hsp90αSNPs間的連鎖關(guān)系，找出了hsp90α基因有代表性的SNPs，以及hsp90α基因在中國漢族人群中的主要單倍型；(2)首次進行了hsp90α基因SNPs與肺癌關(guān)聯(lián)的研究，并在2個不同人群中驗證。本研究的不足和有待深入的地方：(1)可再加大