銀杏頡頏內(nèi)生放線菌生物多樣性暨萵苣葉疫病病原學(xué)研究.pdf

1、本論文由兩部分組成：分離銀杏頡頏內(nèi)生放線菌并對(duì)其進(jìn)行生物多樣性研究；對(duì)葉用萵苣上一種新病害——萵苣葉疫病進(jìn)行病原學(xué)研究。 第一部分：植物內(nèi)生菌指生活于健康植物組織內(nèi)部、不引發(fā)植物產(chǎn)生明顯病癥的微生物，包括真菌、細(xì)菌與放線菌等，它們?cè)谄淙炕虿糠稚钪芷趦?nèi)生活在植物組織內(nèi)。研究表明：內(nèi)生放線菌不僅可促進(jìn)植物生長、提高作物產(chǎn)量，而且在植物組織內(nèi)定殖、生長，并產(chǎn)生抗生素、溶解酶等頡頏物質(zhì)可以增加植物對(duì)病原菌的抗性。銀杏樹是我國特有樹種

2、，抗逆性強(qiáng)，其內(nèi)生放線菌與宿主和諧共生在抵抗病原菌的侵染過程中發(fā)揮著重要作用。本試驗(yàn)擬通過銀杏內(nèi)生放線菌種類多樣性及皿內(nèi)頡頏活性篩選研究，為生物防治提供更多候選生防因子，為今后進(jìn)一步有效利用銀杏內(nèi)生菌微生物資源奠定基礎(chǔ)。 本試驗(yàn)通過對(duì)銀杏葉部、果實(shí)表面消毒、內(nèi)生放線菌的分離培養(yǎng)和形態(tài)特征描述，獲得以下結(jié)果：共獲得內(nèi)生放線菌80株，其中，從葉片上分離得到60株，從果實(shí)上得到20株，分離比率為3∶1。所分內(nèi)生放線菌菌落大小各異，形態(tài)

3、差異顯著，菌落顏色變化復(fù)雜，表明銀杏內(nèi)生放線菌具有豐富的生物多樣性。 銀杏內(nèi)生放線菌活性菌株篩選可獲得高比率的活性菌株。頡頏對(duì)峙初篩試驗(yàn)共獲得活性內(nèi)生放線菌菌株51株，它們對(duì)供試靶標(biāo)菌均有不同程度的頡頏作用，占供試菌株的96.2％；頡頏活性強(qiáng)、抑菌譜廣的菌株有15株，占供試內(nèi)生放線菌菌株的28.3％。發(fā)酵粗提物皿內(nèi)頡頏試驗(yàn)顯示所有發(fā)酵粗提物對(duì)部分靶標(biāo)菌有極強(qiáng)頡頏活性(抑菌圈直徑超過20mm)，并且發(fā)酵粗提物與它們的菌體在平板對(duì)峙

4、試驗(yàn)中表現(xiàn)出來的活性一致，表明銀杏內(nèi)生放線菌是極具潛力的候選生防資源，它們具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。 通過對(duì)銀杏內(nèi)生放線菌PCR產(chǎn)物的16S核糖體DNA的RFLP分析，將30株銀杏內(nèi)生放線菌在100％的相似水平上歸為24類，在78.48％的相似水平上仍被聚類分為11個(gè)類群，其中部分類群具有較高的相似性，多數(shù)類群差異較大，聚類分析結(jié)果表明銀杏內(nèi)生放線菌存在豐富的多樣性。另外，樹狀圖顯示從葉部和果實(shí)可分離得到同種類型的內(nèi)生放線菌，推斷銀杏

5、內(nèi)生放線菌具有在寄主內(nèi)系統(tǒng)存在和擴(kuò)展的能力。 第二部分：發(fā)現(xiàn)葉用萵苣上一種新病害，由Plectosporiumtabacinum侵染引起。通過病原菌的分離、致病性檢驗(yàn)、形態(tài)學(xué)觀察、生物學(xué)培養(yǎng)特性及ITS區(qū)序列分析等方法對(duì)病原菌進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，得其主要特征：無色分生孢子圓筒形，多具一個(gè)隔膜，子囊殼洋梨形，子囊孢子雙胞橢圓形；該病原菌菌落在PDA斜面培養(yǎng)基上及不同pH的PDA平板上均產(chǎn)生顏色變化，從純白色、乳白色到淡粉紅色，兼有像細(xì)菌