2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩64頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、基因組編輯技術(shù)的快速發(fā)展,使得人們能夠按照意愿對(duì)基因組位點(diǎn)進(jìn)行編輯修飾,實(shí)現(xiàn)基因的敲入和敲除?;蚪M編輯技術(shù)能夠利用分子生物學(xué)手段實(shí)現(xiàn)對(duì)基因的改造,從而幫助人們深層次地理解基因的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、基因功能與生物表型之間的關(guān)系,是進(jìn)行基因功能研究、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備和基因治療的重要手段。特別是新興的CRISPR/Cas9技術(shù),以其編輯效率高,制作簡(jiǎn)單和成本低的特點(diǎn),已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于斑馬魚(yú),果蠅,小鼠等模式生物和人類(lèi)細(xì)胞中。該技術(shù)的快速發(fā)展必將給人類(lèi)疾

2、病治療和動(dòng)植物新品種的培育帶來(lái)革新性的改變。在細(xì)胞中,基因組發(fā)生雙鏈斷裂,細(xì)胞啟動(dòng)自身同源重組修復(fù)的效率是極低的,而這種低效率的修復(fù)不能滿足人們對(duì)靶位點(diǎn)精確修復(fù)的要求。同源重組修復(fù)效率的高低跟位點(diǎn)自身以及同源重組片段的大小都有密切的關(guān)系。在之前的研究中人們發(fā)現(xiàn):隨著同源臂的增大,位點(diǎn)的同源重組效率也是逐漸增加的。本實(shí)驗(yàn)以人293T細(xì)胞為平臺(tái),利用CRISPR/Cas9技術(shù)造成基因雙鏈斷裂,用不同大小的同源重組片段(250 bp,500

3、bp,750 bp,1 kb,1.5 kb,2 kb)去重組修復(fù),驗(yàn)證同源片段大小對(duì)同源重組效率的影響。結(jié)果顯示隨著同源片段不斷增大,同源重組效率也是不斷提高的,但是效率增加的幅度并不是均勻的。在一些位點(diǎn)的檢測(cè)中,我們還發(fā)現(xiàn)了同源重組效率隨著同源片段大小的增加呈現(xiàn)先減小后增加的趨勢(shì)。
  本研究建立了一種能夠用分子手段檢測(cè)同源重組效率的方法-AFDA(amplification fragment digestion analysi

4、s),相較于eLIFE上的方法—用200bp的同源片段重組修復(fù),AFDA可以進(jìn)行任何長(zhǎng)度的同源片段的檢測(cè),而且我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小片段的檢測(cè)結(jié)果不具有均一性。對(duì)于不同的位點(diǎn)而言,短片段的重組效率不如長(zhǎng)片段的重組效率更具可靠性,不能代表該位點(diǎn)的真實(shí)重組效率。在HR效率結(jié)果檢測(cè)方法上,本實(shí)驗(yàn)采用了三種不同的方法,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)和Agilent生物芯片技術(shù)。三種方法都能采用,只是對(duì)于效率差別較小的位點(diǎn),瓊脂糖凝膠的分辨

5、率不高。聚丙烯酰胺凝膠的分辨率可以達(dá)到要求,但是整個(gè)實(shí)驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng)。相比較之下,Agilent生物芯片有著明顯的優(yōu)勢(shì),能夠在較短的時(shí)間內(nèi)完成樣品分析,具有高效率,高穩(wěn)定性,高精確性等特點(diǎn)。除此之外,本實(shí)驗(yàn)還以自行構(gòu)建的Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系為平臺(tái),通過(guò)不同類(lèi)型小分子物質(zhì)的添加,驗(yàn)證小分子物質(zhì)對(duì)打靶位點(diǎn)的同源重組效率的影響。結(jié)果證實(shí)兩種類(lèi)型的小分子物質(zhì)確實(shí)能夠促進(jìn)細(xì)胞的同源重組修復(fù)??傊?,本實(shí)驗(yàn)提供一種檢測(cè)HR效率的方法,為高效率靶位點(diǎn)的選取提

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論