鈍裂銀蓮花查尓酮合成酶基因核心片段的擴增及分析.pdf

1、鈍裂銀蓮花(Anemone obtusiloba)是毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亞科銀蓮花屬(Anemone L.)的一種多年生草本植物，其花色有黃色、淺黃色和白色三種。目前對鈍裂銀蓮花的研究主要集中在其藥用價值、性分配、繁殖分配、繁殖特征及資源分配、花部特征等方面，分子層面只有不同環(huán)境條件下鈍裂銀蓮花的ISSR遺傳多樣性分析的報道。本研究結合具體的研究條件，采用從鈍裂銀蓮花花瓣中提取總RNA，反轉錄后進行RT-PCR的方法

2、克隆鈍裂銀蓮花花色合成中的第一個關鍵酶查爾酮合成酶的核心片段，研究結果如下:
　　1.本實驗構建了一種不用進行RNA電泳即可驗證提取的RNA是否可以用于后續(xù)實驗的方法:設計一種骨架蛋白或組成蛋白的基因擴增的引物，以基因組DNA為模板進行PCR擴增，得到的基因片段進行測序，如果該序列為所設計基因的片段，則證明引物設計正確，然后再用該引物對所提取總RNA的反轉錄產(chǎn)物進行擴增，如果同樣可以得到該基因的序列，則證明提取到的總RNA及其反轉

3、錄產(chǎn)物純度較高，可用于RT-PCR反應;
　　2.本實驗通過設計肌動蛋白Actin基因的引物，以葉片基因組DNA為模板進行PCR擴增，得到了Actin基因的序列片段，然后用該引物以花瓣提取的總RNA的反轉錄產(chǎn)物為模板進行PCR，仍然得到了Actin的基因片段，并證明以DNA為模板的擴增產(chǎn)物含有一段內含子基因序列;
　　3.以設計的路線為基礎，根據(jù)GenBank中登錄的查爾酮合成酶(CHS)基因的序列，設計簡并引物，并對提取的