生物衍生骨支架制備分析及其復(fù)合成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　提取乳鼠顱骨來(lái)源的成骨細(xì)胞；制備生物衍生骨支架，分析其理化特性及生物相容性等；并復(fù)合成骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)，研究其對(duì)成骨細(xì)胞在細(xì)胞及分子水平上增殖與分化的影響。
　　材料與方法：
　　1、采用消化傳代法結(jié)合反復(fù)貼壁法，獲取SD乳鼠顱骨來(lái)源的成骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞。
　　2、截取新鮮豬松質(zhì)骨，經(jīng)脫脂、脫蛋白、部分脫鈣及去抗原處理獲得生物衍生骨支架，并進(jìn)行Micro-CT三維結(jié)構(gòu)分析、掃描電鏡形態(tài)觀察、紅外光

2、譜成分分析、急性毒性實(shí)驗(yàn)、熱原性實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)及皮內(nèi)刺激實(shí)驗(yàn)等生物相容性檢測(cè)。
　　3、支架復(fù)合成骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)，研究其對(duì)成骨細(xì)胞在細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶活性及Ⅰ型膠原、骨鈣素基因表達(dá)等分子水平上的影響。
　　結(jié)果：
　　1、提取的細(xì)胞在形態(tài)學(xué)及堿性磷酸酶染色和礦化結(jié)節(jié)染色均符合成骨細(xì)胞生物學(xué)特性。
　　2、經(jīng)脫脂、脫蛋白、部分脫鈣及去抗原處理獲得生物衍生骨支架，經(jīng)Micro-CT掃描分析孔隙率為79.52%，

3、空隙直徑在183μm~400μm之間。掃描電鏡示支架保留天然骨組織的網(wǎng)狀孔隙結(jié)構(gòu)，孔道間具有相互交錯(cuò)的分布，孔徑大小為160μm~390μm，孔道內(nèi)壁平滑無(wú)附著物。紅外光譜分析示脫脂、脫蛋白效果良好，保留了支架的羥基磷灰石成分。支架的浸提液細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)示相同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間細(xì)胞增殖無(wú)顯著差異（p＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相對(duì)增殖率均在80%~99%之間，材料細(xì)胞毒性為1級(jí)，無(wú)明顯細(xì)胞毒性。熱原性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：每個(gè)時(shí)段實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各3只

4、家兔體溫升高＜0.6℃，體溫升高總度數(shù)＜1.4℃，生理鹽水浸提液未引起家兔急性毒性反應(yīng)；紅細(xì)胞溶血率均小于0.5%；皮內(nèi)刺激實(shí)驗(yàn)評(píng)分為0，即無(wú)皮內(nèi)刺激反應(yīng)。
　　3、掃描電鏡顯示成骨細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)狀態(tài)良好；細(xì)胞活力在第1、3天和第13天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在第5、7、9、11天時(shí)實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組（p＜0.05）；堿性磷酸酶活性在第1、3、11天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在第5、7、9天時(shí)實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組

5、（p＜0.05）；COLⅠ的表達(dá)在第3、7天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組（p＜0.05）；OCN表達(dá)在第11天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組（p＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、通過(guò)消化傳代法結(jié)合反復(fù)貼壁法成功獲取成骨細(xì)胞。
　　2、經(jīng)物理化學(xué)等方法處理獲得生物衍生骨支架在三維結(jié)構(gòu)、組成成分及各項(xiàng)生物相容性指標(biāo)等方面均符合骨組織工程對(duì)于支架的要求。
　　3、支架復(fù)合成骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)環(huán)境，生物衍生骨支架為細(xì)胞增殖提供廣