脂多糖致大鼠急性肺損傷模型中部分炎癥介質(zhì)的變化與依達(dá)拉奉保護(hù)作用及其可能機(jī)制的研究.pdf

1、通過觀察LPS誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷的肺組織病理變化、部分炎癥介質(zhì)和NF-κBp65的表達(dá)，了解氧化應(yīng)激、炎性細(xì)胞因子以及NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化在急性肺損傷時(shí)的變化情況。進(jìn)一步通過觀察依達(dá)拉奉干預(yù)后急性肺損傷大鼠的肺組織病理、部分炎癥介質(zhì)及NF-κBp65的改變，明確依達(dá)拉奉對(duì)大鼠急性肺損傷是否具有保護(hù)作用以及可能的機(jī)制。 方法：健康Wistar雄性大鼠72只，隨機(jī)分成生理鹽水對(duì)照組(NS組，n=24)、模型組(LPS組，n=

2、24)、依達(dá)拉奉治療組(ED+LPS組，n=24、)，各組再分2h，6h和12h三個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)，每組各8只大鼠。生理鹽水對(duì)照組在相同的時(shí)間點(diǎn)注射等量生理鹽水，模型組采用尾靜脈注射LPS 10 mg／kg誘發(fā)大鼠ALI模型，依達(dá)拉奉治療組在LPS注射后立即注射依達(dá)拉奉3 mg／kg。觀察各組大鼠一般狀態(tài)變化，在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)分別處死大鼠，并留取相應(yīng)肺組織和血標(biāo)本。測(cè)定大鼠Pa02和肺組織濕干重比，觀察肺組織大體改變，顯微鏡觀察肺組織HE染色

3、病理切片，進(jìn)行病理評(píng)分；測(cè)定肺組織勻漿中反映氧化損傷的指標(biāo)包括MPO、MDA、iNOS和抗氧化指標(biāo)SOD含量；ELISA法測(cè)定血清細(xì)胞因子TNF-α和IL-10濃度；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織NF-κBp65的表達(dá)情況，并進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1．一般狀態(tài)觀察：NS組大鼠開始呼吸稍快但很快轉(zhuǎn)為平穩(wěn)，未見紫紺，活動(dòng)及飲水基本正常，未見異常排瀉物，抓取時(shí)迅速逃避；LPS組大鼠在注射LPS后毛發(fā)豎起，極少活動(dòng)，呼吸明顯加快，

4、拒絕飲水，排稀水樣便，抓取時(shí)無力逃避，以6h最為明顯并伴有紫紺，有兩只大鼠在LPS注射后近6h時(shí)因呼吸困難死亡；ED+LPS組大鼠呼吸急促程度較LPS組輕，個(gè)別大鼠出現(xiàn)輕微紫紺，大鼠較LPS組活潑，可自行活動(dòng)及飲水，解少量糊狀便，抓取時(shí)能夠逃避。 2．PaO<,2>的變化：NS組大鼠：PaO<,2>波動(dòng)在104.5mmHg左右；與NS組比較，LPS組大鼠各時(shí)間點(diǎn)PaO<,2>均顯著降低(P<0.01)，在LPS注射后6h最低；E

5、D+LPS組各時(shí)間點(diǎn)PaO<,2>均高于LPS組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但仍低于NS組水平(P<0.01)。 3．肺組織濕干重比變化：NS組大鼠肺組織W/D波動(dòng)在3.88左右；LPS組在各時(shí)間點(diǎn)肺組織W/D與NS組比較均顯著增加(P<0.01)，在LPS注射后6h最高；ED+LPS組各時(shí)間點(diǎn)肺組織W/D均較LPS組降低(P<0.01)，但尚高于NS組水平(P<0.01)。 4．病理變化：大體觀察NS組大鼠兩肺成均勻的粉白色

6、，表面光滑，無出血灶，無腫脹；光學(xué)顯微鏡見肺泡間隔無增厚，可見少量炎性細(xì)胞，肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰；NS組ALI病理評(píng)分最低。LPS組兩肺出現(xiàn)程度不一的腫脹充血，重者可見散在出血點(diǎn)；光學(xué)顯微鏡可見肺泡間隔明顯增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和紅細(xì)胞漏出，重者大片肺泡腔萎陷不張，肺泡腔內(nèi)有透明膜形成，肺損傷在6h最嚴(yán)重；LPS組各時(shí)間點(diǎn)ALI病理評(píng)分均高于NS組(P<0.01)。依達(dá)拉奉治療后使肺損傷病理改變不同程度減輕，ED+LPS組各時(shí)間點(diǎn)ALI

7、病理評(píng)分較LPS組降低(P<0.01)，尚高于NS組(P<0.01)。 5.肺組織勻漿中反映氧化損傷的指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的變化：LPS組大鼠肺組織勻漿中MPO、MDA和iNOS含量同NS組比較各時(shí)間點(diǎn)均升高(P<0.01)，在6 h時(shí)達(dá)高峰，而肺組織勻漿中SOD含量各時(shí)間點(diǎn)均低于NS組(P<0.01)；依達(dá)拉奉治療后大鼠肺組織勻漿內(nèi)MPO、MDA和iNOS含量均較LPS組降低(P<0.01)，但仍高于NSN(P<0.01、)，同時(shí)

8、依達(dá)拉奉治療后大鼠肺組織勻漿內(nèi)SOD活性較LPS組升高(P<0.01)，但低于NS組(P<0.01)。 6.血清炎性細(xì)胞因子的變化：與NS組比較，LPS組各時(shí)間點(diǎn)大鼠血清TNF-α濃度升高(P<0.01)，2h達(dá)高峰，隨時(shí)間推移而降低，12h仍高于NS組；依達(dá)拉奉治療后大鼠血清TNF-α濃度較LPS組明顯降低(P<0.01)，但仍高于NS組(P<0.01)。LPS組各時(shí)間點(diǎn)大鼠血清IL-10含量均高于NS組(P<0.01)，隨時(shí)

9、間推移呈上升趨勢(shì)；ED+LPS組血清IL-10濃度MLPS組比較無明顯變化，各時(shí)間點(diǎn)均高于NS組(P<0.01)。 7.NF-κBp65表達(dá)：NS組可見少量散在的NF-κBp65陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物，主要位于胞漿中。LPS組可見較多NF-κBp65陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物，隨著LPS刺激時(shí)間的不同而變化，在6h時(shí)最明顯，NF-kBp65陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物主要位于細(xì)胞核中，表明NF-kB被激活；各時(shí)間點(diǎn)NF-kBp65的IOD同NS組比較均升高

10、(P＜O.01)。ED+LPS組NF-kBp65陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物也主要位于細(xì)胞核，但表達(dá)強(qiáng)度較LPS組降低；各時(shí)間點(diǎn)NF-kBp65的IOD較LPS組降低(P＜O.01)，但仍高于NS組(P＜O.01)，表明經(jīng)依達(dá)拉奉處理后，LPS誘導(dǎo)增加的大鼠肺組織NF-kB表達(dá)受到抑制。 結(jié) 論： 1．通過靜脈注射LPS可以成功復(fù)制大鼠ALI模型。 2．LPS注射后導(dǎo)致大鼠肺組織內(nèi)反映氧化損傷的指標(biāo)MPO、MDA和iNOS升

11、高，抗氧化指標(biāo)SOD降低；血清促炎細(xì)胞因子TNF-α升高和抗炎細(xì)胞因子IL-10早期相對(duì)不足。LPS應(yīng)用后還導(dǎo)致肺組織NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化。 3．依達(dá)拉奉對(duì)ALI具有保護(hù)作用。其機(jī)制是依達(dá)拉奉能清除自由基，抑制 NF-kB活化，從而一方面抑制肺內(nèi)炎性細(xì)胞的聚集和氧化應(yīng)激，降低肺組織MPO、MDA和iNOS含量，增加肺組織SOD活性；另一方面還可以抑制LPS誘導(dǎo)的促炎性細(xì)胞因子TNF-α釋放，而不影響抗炎性細(xì)胞因子IL-1