Smad2與Smad3參與TGF-β誘導(dǎo)的后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生的研究.pdf

1、分類號：R77密級：不保密學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口。學(xué)校代碼：10062學(xué)號：2011601121學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪鼉科鼻號TlAN塒N__EOlCAL刪一lVE翻$lTY博士學(xué)位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目：Smad2與Smad3參與TGFp誘導(dǎo)的后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生的研究TITLEImplicationofSmad2andSmad3intransforminggrowthfactorpinducedpost

2、eriorcapsularopacificationofhumanlensepithelialcells一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：眼科學(xué)論文作者：李華指導(dǎo)教師：湯欣教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的后發(fā)性白內(nèi)障(posteriorcapsularopacification，PCO)作為白內(nèi)障術(shù)后主要并發(fā)癥，可導(dǎo)致患者視力再次下降。多種細(xì)胞因子參與了后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展過程，其中TGFp2的調(diào)節(jié)

3、作用尤為重要，是重要的Smad通路介導(dǎo)發(fā)生的。本研究旨在深入研究選擇性過表達(dá)Smad2或Smad3對后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生分別所起的作用，研究TGF132／Smad2和TGF132／Smad3信號傳導(dǎo)通路在晶狀體上皮細(xì)胞生長、凋亡、遷移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)作用，從而達(dá)到探索對后發(fā)性白內(nèi)障基因治療的目的。方法以pcDNA31為質(zhì)粒載體，分別構(gòu)建Smad2和Smad3過表達(dá)載粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，酶切、測序進(jìn)行鑒定。體外培養(yǎng)人晶狀體上皮

4、細(xì)胞HLEB3，通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法分別過量表達(dá)Smad2或Smad3，并加入lng／mlTGFB2以選擇性激活TGF132／Smad2或TGFp2／Smad3信號傳導(dǎo)通路。通過MTT方法和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測TGF132／Smad2和TGF132／Smad3信號傳導(dǎo)通路對HLEB3的生長、凋亡的影響，通過Transwell小室檢測細(xì)胞的遷移能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清的可溶性細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)情況。Westernblot，Realt

5、imePCR和免疫熒光染色檢測細(xì)胞外基質(zhì)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的表達(dá)。爭士甲三口木1成功構(gòu)建Smad2、Smad3真核表達(dá)載體，進(jìn)行酶切、測序分析，確定為所需序列。2Smad3過表達(dá)并激活TGF132／Smad3信號傳導(dǎo)通路可抑制HLEB3細(xì)胞的生長，與對照組相比有明顯意義(PO05)。選擇性激活TGF132／Smad3信號通路使細(xì)胞的凋亡率較激活TGF132／Smad2信號通路組明顯增加(PO05)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Smad3過表