肝細(xì)胞癌中TGFβ1及Smad2、Smad4基因表達的初步探討.pdf

1、我國為原發(fā)性肝癌(PHC)高發(fā)地區(qū)，且形勢嚴(yán)峻。就死亡率而言，我國PHC為第3位癌癥，每年有11萬人死于肝細(xì)胞癌(HCC)，其中男性8萬，女性3萬，占全世界PHC死亡數(shù)的45％。眾多學(xué)者報道，HCC與HBV、HCV肝炎，肝纖維化，肝硬化關(guān)系密切，這就為PHC的預(yù)防帶來諸多困難。因此，肝癌的發(fā)病機制研究仍是目前研究的熱點，特別是TGF-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用日益受到重視。因此，我們收集了我院近年來HCC的臨床手術(shù)標(biāo)本

2、，并觀察癌與癌旁組織中Smad2蛋白、Smad2mRNA、Smad4蛋白、Smad4mRNA的表達，以及TGFβ1與AFP的變化，初步探討TGFβ1、Smad基因在PHC發(fā)生中的可能作用機制。 材料與方法1、經(jīng)臨床手術(shù)切除HCC帶癌旁組織標(biāo)本41例，其中男30例，女11例；年齡29-67歲，平均51.1歲。5例外傷性肝破裂手術(shù)切除標(biāo)本作正常對照。運用免疫組化(IHC)ABC法檢測HCC組織切片中癌與癌旁TGFβ1與AFP的表達；

3、染色結(jié)果參照Fromowitz等的綜合計分法，陽性細(xì)胞按百分比計為0-4分，陽性信號按強度計為0-3分，兩分相加，0分為陰性(一)，2-3分為弱陽性(+)，4-5分為中度陽性(++)，6-7分為強陽性(+++)。比較癌與癌旁TGFβ1與AFP表達的差異。 2、運用IHCABC法及原位雜交法(ISH)檢測HCC組織切片中癌與癌旁Smad2蛋白、Smad2mRNA的表達。比較癌與癌旁Smad2蛋白、Smad2mRNA表達的差異。

4、 3、運用IHCABC法及ISH法檢測HCC組織切片中癌與癌旁Smad4蛋白、Smad4mRNA的表達。比較癌與癌旁Smad4蛋白、Smad4mRNA表達的差異。 4、統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS10.0軟件進行t檢驗、方差分析、秩和檢驗等，以P＜0.05認(rèn)為具備顯著性差異。 結(jié)果1、41例HCC中，參照Edmondson和Steiner標(biāo)準(zhǔn)分級法，總計：Ⅰ級7例，Ⅱ級8例，Ⅲ級6例，Ⅳ級20例。正常對照組AFP、TGFβ

5、1、Smad2蛋白、Smad2mRNA均呈陰性表達，Smad4蛋白、Smad4mRNA均呈陽性表達。 2、HCC組織中AFP、TGFβ1、Smad2蛋白、Smad2mRNA、Smad4蛋白和Smad4mRNA陽性表達率分別為70.7％(29/41)，75.6％(31/41)，43.9％(18/41)，61.0％(25/41)，48.4％(20/41)和53.6％(22/41)。 3、HCC癌旁組織中AFP、TGFβ1、S

6、mad2蛋白、Smad2mRNA、Smad4蛋白和Smad4mRNA陽性表達率分別為52.1％(25/41)，95.1％(39/41)，56.1％(23/41)，82.9％(34/41)，78.0％(32/41)和73.1％(30/41)。 4、與正常肝組織比較，HCC組織中AFP、TGFβ1、Smad2蛋白和Smad2mRNA陽性表達均顯著升高(P值均＜0.05)；Smad4蛋白和Smad4mRNA陽性表達則顯著下降(P值均＜

7、0.05)。 5、HCC組織中AFP、TGFβ1、Smad2蛋白、Smad2mRNA、Smad4蛋白的表達與病理分級無顯著相關(guān)性(P值均＞0.05)，但Smad4mRNA的表達高分化組(Ⅰ+H級)與低分化組(Ⅲ+Ⅳ級)之間存在顯著差異(P＜0.05)，其中低分化組的陽性表達缺失率更高。 6、HCC組織中TGFβ1與AFP之間、Smad2蛋白與Smad2mRNA之間、Smad4蛋白和Smad4mRNA之間陽性信號強度均無顯

8、著差異(P值均＞0.05)；癌旁組織中TGFβ1陽性信號強度顯著高于AFP(P＜0.05)，Smad2mRNA陽性信號強度顯著高于Smad2蛋白(P＜0.05)，而Smad4蛋白和Smad4mRNA之間則無顯著差異(P＞0.05)。 7、癌旁組織中TGFβ1、Smad4蛋白、Smad2mRNA陽性信號強度顯著高于HCC組織中(P值均＜0.05)，而AFP則顯著低于HCC組織(P＜0.05)。 8、HCC組織中TGFβ1與

9、AFP、Smad2蛋白、Smad4蛋白、Smad4mRNA無顯著相關(guān)性(P＞0.05)，但Smad2mRNA與TGFβ1呈正相關(guān)(P＜0.05)。 9、癌旁組織中Smad2蛋白的陽性面積百分比、光密度及Smad2mRNA的陽性面積百分比均顯著高于HCC(P值均＜0.05)。HCC癌旁組織中Smad4蛋白的光密度及Smad4mRNA的陽性面積百分比、光密度均顯著高于HCC(P值均＜0.05)。 結(jié)論1、TGFβ1作為一種細(xì)

10、胞生長的雙向調(diào)控因子，在HCC組織中較正常肝組織呈現(xiàn)高表達，與AFP基本在同一水平，表明其參與肝細(xì)胞惡性表型轉(zhuǎn)化；且有一定趨勢表明分化好的癌組織TGFβ1表達量偏高，癌旁表達也較AFP明顯，提示TGFβ1有可能成為惡變肝細(xì)胞向HCC發(fā)展的早期參考指標(biāo)，同時對于交界性病例的輔助診斷可能具有一定參考價值。 2、Smad2蛋白在HCC中較正常肝組織高表達，與肝硬化等慢性肝損傷中的表達情況極為類似，充分說明肝硬化與肝癌之間關(guān)系密切，Sm

11、ad2在肝硬化向肝癌過渡過程中可能起到催化劑的作用。同時，Smad2mRNA表達顯著高于Smad2蛋白，提示HCC中不僅存在基因突變，而且可能存在某種物質(zhì)，如Smad6、7等負(fù)調(diào)控Smad2的轉(zhuǎn)錄和翻譯。 3、Smad4蛋白在HCC中較正常肝組織低表達，癌旁組織表達高于癌組織。也許提示Smad4的缺失，可導(dǎo)致TGFβ信號傳導(dǎo)通路中斷，誘發(fā)HCC；且細(xì)胞分化程度愈差，其表達缺失率就愈高，或許說明Smad4缺失造成的TGFβ信號傳導(dǎo)

12、通路變化在HCC形成機制中起一定作用。因此也將其視為HCC的惡性表型特征之一。 4、HCC組織中TGFβ1高陽性表達，癌及癌旁的Smad2、Smad4的蛋白及mRNA的差異表達，提示TGFβ-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對肝炎→肝硬化→肝癌三步曲進程中細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化具有某種調(diào)控作用。 5、TGFβ-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與HCC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，確切作用機制尚不清楚。隨著分子生物學(xué)及PHC發(fā)病機制研究的不斷進展，TGFβ1及Smad