組織芯片研究血管生成因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、組織芯片的概念是1998年由Kononen等首次提出，即將數(shù)十個(gè)、數(shù)百個(gè)乃至上千個(gè)小的組織片按預(yù)先設(shè)計(jì)的需要整齊地排放在某一載體上(通常是載玻片)而成的矩陣微縮組織切片。它可以克服傳統(tǒng)病理技術(shù)只能逐個(gè)組織切片進(jìn)行研究的方式，從而成百、成千倍地提高效率，一次檢測(cè)即可獲取大量的生物學(xué)信息，且可以很好地代表其供體組織的組織特點(diǎn)，大大減少研究時(shí)間和經(jīng)費(fèi)耗費(fèi)。同時(shí)，組織芯片技術(shù)可以與DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗體等技術(shù)相結(jié)合，在基因、基因轉(zhuǎn)錄和相關(guān)

2、表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)功能三個(gè)水平上進(jìn)行研究。這對(duì)人類基因組學(xué)的研究與發(fā)展，尤其對(duì)基因和蛋白質(zhì)與疾病關(guān)系的研究、疾病相關(guān)基因的驗(yàn)證、疾病的分子診斷、治療過(guò)程的追蹤和預(yù)后等方面具有實(shí)際意義和廣闊的市場(chǎng)前景。 原發(fā)性肝癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，其死亡率占全球惡性腫瘤死亡率的第三位，為我國(guó)惡性腫瘤死亡率的第二位，而肝細(xì)胞肝癌(HCC，以下簡(jiǎn)稱肝癌)占我國(guó)原發(fā)性肝癌中的80％以上。盡管肝癌的預(yù)防、早期診斷及治療等均取得了可喜的進(jìn)步，但肝癌人群的總

3、體預(yù)后仍無(wú)顯著提高，5年生存率只有5％左右，肝內(nèi)播散轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是阻礙病人術(shù)后長(zhǎng)期生存的最嚴(yán)重問(wèn)題。 肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多環(huán)節(jié)的過(guò)程。Folkman等1971年提出了腫瘤生長(zhǎng)依賴新生血管的概念。而肝癌是富血管實(shí)體瘤，不管是肝內(nèi)復(fù)發(fā)還是肝外轉(zhuǎn)移，直接或間接參與血管生成的因素在肝癌的術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)中起非常重要的作用。當(dāng)前，腫瘤血管生成的評(píng)估包括腫瘤微血管密度(MVD)和血管生成因子檢測(cè)兩個(gè)方面。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)

4、、血小板衍化內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(PD-ECGF)等是重要的血管生成因子，與腫瘤的MVD和預(yù)后相關(guān)。 復(fù)發(fā)的預(yù)防措施主要是抑制、消滅殘癌，防止腫瘤再發(fā)。目前對(duì)于術(shù)后復(fù)發(fā)率高這樣一個(gè)現(xiàn)象的對(duì)策是：術(shù)后給予預(yù)防性化療栓塞或干擾素的大劑量治療等方法。但是目前更合理的方案是選擇性地對(duì)復(fù)發(fā)高危患者實(shí)施預(yù)防性治療，減輕患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此臨床迫切需要能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)病人預(yù)后的指標(biāo)。 本課題擬應(yīng)用組織芯片技術(shù)來(lái)制備肝癌組織芯片，并將其應(yīng)

5、用于研究MVD和血管生成因子VEGF和PD-ECGF在肝癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法： 1．肝細(xì)胞癌組織芯片的制作 隨機(jī)選取1997年1月～2000年12月間在中山醫(yī)院肝癌研究所第一次行肝癌切除術(shù)，并經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)為肝細(xì)胞肝癌的400例病人的組織標(biāo)本石蠟塊，應(yīng)用組織芯片技術(shù)分別制作成5組各100例中密度肝癌組織芯片：A組一AFP(甲胎蛋白)陰性未復(fù)發(fā)組芯片；B組一AFP陰性復(fù)發(fā)組芯片；C組一AFP陽(yáng)性

6、未復(fù)發(fā)組芯片；D組一AFP陽(yáng)性復(fù)發(fā)組芯片以及E組一相應(yīng)的癌旁對(duì)照組芯片。芯片上各組織點(diǎn)直徑均為lmm，組織芯片位點(diǎn)排列整齊，較少移位和脫點(diǎn)。 2．血管生成因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法研究肝癌組織芯片中MVD計(jì)數(shù)及VEGF和PD-ECGF的表達(dá)情況。單因素方差分析比較組間MVD差異，Log-rank法比較不同VEGF和PD-ECGF表達(dá)組間5年生存率(以下簡(jiǎn)稱生存率)和5年無(wú)瘤生存率(以

7、下簡(jiǎn)稱無(wú)瘤生存率)的差別?？ǚ綑z驗(yàn)(Fisher精確檢驗(yàn)法)比較各組間5年累積復(fù)發(fā)率(以下簡(jiǎn)稱復(fù)發(fā)率)和5年累積死亡率(以下簡(jiǎn)稱死亡率)之間的差別；聯(lián)合檢測(cè)VEGF和PD-ECGF以評(píng)定其對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)作用。COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析以了解各個(gè)相關(guān)因素對(duì)生存率和無(wú)瘤生存率的影響。 結(jié)論： (1)組織芯片具有高通量、高效、快速的特點(diǎn)，其組織位點(diǎn)基本可以代表傳統(tǒng)病理切片上的組織病理特征，即從組織芯片得到的研究結(jié)果能夠代表

8、原組織的所有信息。 (2)腫瘤MVD計(jì)數(shù)與肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)。 (3)腫瘤PD-ECGF表達(dá)陽(yáng)性提示肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)率和死亡率增高，生存率和無(wú)瘤生存率均顯著降低。 (4)腫瘤VEGF表達(dá)陽(yáng)性提示術(shù)后高復(fù)發(fā)可能，無(wú)瘤生存率顯著降低，但與生存率和死亡率無(wú)相關(guān)性。 (5)腫瘤VEGF和PD-ECGF同時(shí)表達(dá)陽(yáng)性病例的復(fù)發(fā)率顯著高于非同時(shí)陽(yáng)性病例，其無(wú)瘤生存率顯著降低，而在生存率和死亡率方面則無(wú)顯著差異。