自體尿源性干細胞結合3D多孔小腸粘膜下基質用于兔尿道重建的實驗研究.pdf

1、目的：探索應用自體兔尿源干細胞細胞（rabbit urine-derived stem cells，rUSCs）復合小腸黏膜下基質（Small intestinal submucosa，SIS）構建兔組織工程尿道的可行性，為臨床構建組織工程尿道，用于尿道下裂殘疾、長段尿道缺損等復雜、疑難情況尿道重建奠定基礎。
　　方法：收集24只雄性新西蘭大白兔尿液及膀胱沖洗液，分離、培養(yǎng)得到rUSC，檢測其自我更新及體外多向分化（平滑肌和上皮方

2、向）能力；用5%過氧乙酸（peracetic acid，PAA）處理SIS材料，對其微結構、免疫原性、生物相容性進行研究，并將PKH67標記的rUSCs與SIS材料復合；隨機將24只雄性新西蘭大白兔分為兩組，并建立尿道缺損模型，缺損長度約為2.0cm，對照組應用單純5% PAA處理后的SIS材料修復（12只），實驗組應用5% PAA處理后并復合rUSCs的SIS材料修復（12只）。均于術后2周、3周、4周、12周行組織學和Western

3、 Blot檢測，12周行尿道造影。
　　結果：原代培養(yǎng)第4天即可在鏡下觀察到rUSC單克隆細胞，在第6天可形成克隆團，在第11天出現(xiàn)細胞融合，形態(tài)成“米粒”狀，大小均一、排列緊湊；rUSCs經體外誘導分化后，能高效的分化為平滑肌細胞和上皮細胞。經5%PAA處理后，SIS材料表面變得疏松多孔，且DNA含量進一步降低（P＜0.05）；組織學提示實驗組平滑肌束再生在各個時間點均優(yōu)于對照組（P＜0.05），且更有序；上皮層數(shù)和新生血管數(shù)量

4、在早期（2、3、4周）好于對照組（P＜0.05），在晚期（12周）差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；對照組基質出現(xiàn)炎性細胞浸潤和纖維化；尿道造影顯示實驗組僅一只出現(xiàn)輕微尿道狹窄，而對照組三只均出現(xiàn)輕微尿道狹窄。免疫熒光顯示 rUSCs在體內可轉化為平滑肌和上皮細胞。
　　結論：1）rUSCs能夠通過簡單無創(chuàng)的方法獲取，具有良好的自我更新能力，體外易于培養(yǎng)和擴增，并且具有分化成平滑肌細胞和上皮細胞的能力，是一種理想的組織工程種子細胞