小腸黏膜下基質(zhì)復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞重建陰道的可行性研究.pdf

1、目的：研究脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在小腸黏膜下基質(zhì)重建陰道過(guò)程中的作用，為組織工程學(xué)陰道重建探討新的思路。
　　方法：采用Ⅰ型膠原酶消化法分離提取SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ASCs），流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)第3代ASCs細(xì)胞表面CD90、CD45、CD29、CD34、CD44、CD105抗原的表達(dá)情況，對(duì)第3代ASCs進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)，茜素紅及油紅O染色鑒定誘導(dǎo)分化情況。將第3代ASC

2、s按照2×105/cm2、4×105/cm2的細(xì)胞密度與SIS復(fù)合培養(yǎng)，于復(fù)合后24h、3d、5d及7d行MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。CM.dil標(biāo)記第2代ASCs，熒光顯微鏡下觀察。將標(biāo)記后第3代ASCs按照細(xì)胞計(jì)數(shù)1.5×106個(gè)與2×2cm2的SIS支架復(fù)合培養(yǎng),5天后移植。選取200-250g雌性SD大鼠，手術(shù)切除正常陰道后分別將單純SIS支架或復(fù)合有CM.dil標(biāo)記ASCs的SIS支架植入陰道殘腔內(nèi)，上端與宮頸口縫合固定，下端與切

3、口周圍皮膚吻合。術(shù)后7d、14d、28d切取“人工陰道”組織，復(fù)合支架組行冰凍切片，熒光顯微鏡下檢測(cè)標(biāo)記有CM.dil的ASCs殘留情況，單純支架組及復(fù)合支架組“人工陰道”均進(jìn)行HE、Masson染色，對(duì)比兩組“人工陰道”組織結(jié)構(gòu)學(xué)特點(diǎn)，進(jìn)而比較陰道重建效果。
　　結(jié)果：采用酶消化法提取的ASCs形態(tài)為長(zhǎng)梭形，融合度達(dá)80％后呈螺旋狀排列。流式檢測(cè)：第3代ASCs細(xì)胞表面抗原CD44、CD90、CD29、CD105、CD34及CD

4、45的表達(dá)率分別為97.48%、99.91%、99.99%、100%、58.05%和0.79%。茜素紅及油紅O染色均為陽(yáng)性。MTT法檢測(cè)ASCs與SIS復(fù)合培養(yǎng)5d細(xì)胞存活率最高。熒光顯微鏡下觀察CM.dil標(biāo)記的ASCs細(xì)胞膜呈橙紅色，細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核則表達(dá)為類圓形暗區(qū)，標(biāo)記率可達(dá)100%。移植后的單純SIS支架組及復(fù)合有ASCs的SIS支架組均可形成新生管狀陰道，復(fù)合支架組冰凍切片免疫熒光檢測(cè)可見(jiàn)CM.dil標(biāo)記的ASCs存在于組織各