SHP-2酪氨酸磷酸酶在DNA損傷性放、化療引發(fā)的骨髓細胞毒中的調控作用及機制初探.pdf

1、目的：研究酪氨酸磷酸酶SHP-2在放、化療引發(fā)的骨髓細胞毒中的調節(jié)作用，初步探討其可能的分子機制。 方法：分別從野生型(Wild-type，WT)、SI-IP-2雜合突變型(SI-IP-2+/-)及SHP-2純合突變(SI-IP-2-/-)的胚胎鼠(9.0-9.5天)的卵黃囊中獲取造血祖細胞，使用細胞因子IL-3(Intedeukin，0.5ng/m1)、SCF(stem cell factor,0.5ng/m1)將造血祖細胞定

2、向誘導分化為粒-巨噬造血細胞系(granulocyte-macrophage，GM)。60Co1，射線及化療藥物順鉑(Cisplatin，CDDP)處理后，采用臺盼藍染色法觀察比較三種GM細胞增殖抑制率的差異，采用集落形成實驗(Colony-forming Units，CFU)分析比較卵黃囊造血祖細胞集落形成能力的差異；血細胞計數(shù)法檢測比較WT小鼠和SHP-2=/-小鼠在照射或化療后外周血中白細胞、紅細胞及血紅蛋白水平的變化；應用逆轉錄

3、病毒轉染技術，在SI-IP-2-/-造血細胞中轉回SHP-2基因，建立SHP-2拯救細胞系(Rescued cell)，流式細胞術(fluorescence-activated cell sorting，F(xiàn)ACS)檢測細胞周期，觀察比較WT、Rescued和SHP-2-/-三種造血細胞的細胞周期阻滯情況。Western Blot檢測細胞周期蛋白Chkl、Cdc2、Erk、p38在WT及SHP-2-/-造血細胞中的表達與磷酸化水平。

4、 結果：在CDDP或60Co 1，射線導致的細胞損傷反應中，SHP-2-/-造血細胞的生存能力較SHP-2=/-和WT造血細胞增強；相比WT小鼠，SHP-2-/-組小鼠的白細胞、血紅蛋白及紅細胞數(shù)量降低程度減輕；SHP-2-/-造血祖細胞克隆集落形成能力較SHP-2+/-組及WT組增強；提示SHP-2-/-突變可以減輕CDDP或60Co導致的骨髓毒性。FACS對細胞周期的檢測表明WT和Rescued造血細胞在CDDP誘導下發(fā)生明顯G