SHP-2酪氨酸磷酸酶在DNA損傷性放、化療引發(fā)的骨髓細(xì)胞毒中的調(diào)控作用及機(jī)制初探.pdf

1、目的：研究酪氨酸磷酸酶SHP-2在放、化療引發(fā)的骨髓細(xì)胞毒中的調(diào)節(jié)作用，初步探討其可能的分子機(jī)制。 方法：分別從野生型(Wild-type，WT)、SI-IP-2雜合突變型(SI-IP-2+/-)及SHP-2純合突變(SI-IP-2-/-)的胚胎鼠(9.0-9.5天)的卵黃囊中獲取造血祖細(xì)胞，使用細(xì)胞因子IL-3(Intedeukin，0.5ng/m1)、SCF(stem cell factor,0.5ng/m1)將造血祖細(xì)胞定

2、向誘導(dǎo)分化為粒-巨噬造血細(xì)胞系(granulocyte-macrophage，GM)。60Co1，射線及化療藥物順鉑(Cisplatin，CDDP)處理后，采用臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察比較三種GM細(xì)胞增殖抑制率的差異，采用集落形成實(shí)驗(yàn)(Colony-forming Units，CFU)分析比較卵黃囊造血祖細(xì)胞集落形成能力的差異；血細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)比較WT小鼠和SHP-2=/-小鼠在照射或化療后外周血中白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血紅蛋白水平的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄

3、病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，在SI-IP-2-/-造血細(xì)胞中轉(zhuǎn)回SHP-2基因，建立SHP-2拯救細(xì)胞系(Rescued cell)，流式細(xì)胞術(shù)(fluorescence-activated cell sorting，F(xiàn)ACS)檢測(cè)細(xì)胞周期，觀察比較WT、Rescued和SHP-2-/-三種造血細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯情況。Western Blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白Chkl、Cdc2、Erk、p38在WT及SHP-2-/-造血細(xì)胞中的表達(dá)與磷酸化水平。

4、 結(jié)果：在CDDP或60Co 1，射線導(dǎo)致的細(xì)胞損傷反應(yīng)中，SHP-2-/-造血細(xì)胞的生存能力較SHP-2=/-和WT造血細(xì)胞增強(qiáng)；相比WT小鼠，SHP-2-/-組小鼠的白細(xì)胞、血紅蛋白及紅細(xì)胞數(shù)量降低程度減輕；SHP-2-/-造血祖細(xì)胞克隆集落形成能力較SHP-2+/-組及WT組增強(qiáng)；提示SHP-2-/-突變可以減輕CDDP或60Co導(dǎo)致的骨髓毒性。FACS對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)表明WT和Rescued造血細(xì)胞在CDDP誘導(dǎo)下發(fā)生明顯G