泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽孝：乙商芻鰳泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究中文摘要中文摘要目的：闡明

2、泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用并探討其保護(hù)機(jī)制方法：第一部分，P188對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用采用大腦中動(dòng)脈栓塞法建立小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，再灌注前尾靜脈單次注射不同劑量的P188，24小時(shí)后測定腦梗死體積(TTC染色法)，腦含水量以及神經(jīng)癥狀評分以評價(jià)短期保護(hù)作用。為進(jìn)一步觀察P188的長期效應(yīng)，小鼠尾靜脈注射P188后再每天單次腹腔注射P188，3周后評估小鼠的生存期，應(yīng)用爬桿實(shí)驗(yàn)和懸掛實(shí)驗(yàn)測定肢體運(yùn)動(dòng)功能

3、，尼氏染色法測定腦萎縮。此外，體外建立海馬神經(jīng)細(xì)胞系(HT22)的糖氧剝奪模型，檢測P188對細(xì)胞活力和乳酸脫氫酶釋放的影響。第二部分，泊洛沙姆188對腦缺血保護(hù)作用的機(jī)制研究小鼠缺血再灌注損傷后，碘化丙啶(PI，非膜穿透性染料)側(cè)腦室注射應(yīng)用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞膜完整性。體外應(yīng)用低濃度TritonX100輕度裂解細(xì)胞膜，觀察P188處理前后，細(xì)胞對碘化丙啶(紅色熒光)和SYl的X⑧Ghen(非膜穿透性染料，綠色熒光)兩種染料的通透性，探

4、討P188對細(xì)胞膜的直接修復(fù)作用。進(jìn)一步，應(yīng)用伊文思藍(lán)漏出實(shí)驗(yàn)檢測小鼠缺血再灌注損傷后的血腦屏障的完整性，同時(shí)應(yīng)用酶譜法和免疫印跡分析P188對基質(zhì)金屬蛋白酶9的活性和表達(dá)的影響。此外，為了探討P188對細(xì)胞內(nèi)膜的影響，對P188進(jìn)行銥配合物標(biāo)記(自帶黃綠色熒光)，熒光顯微鏡觀察P188在HT22細(xì)胞和小鼠缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞中的分布。在證實(shí)P188能穿透細(xì)胞膜后，分離出腦缺血再灌注組織的溶酶體或線粒體，westernblot檢測P18