泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學或其它教育機構的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽孝：乙商芻鰳泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制研究中文摘要中文摘要目的：闡明

2、泊洛沙姆188對腦缺血再灌注損傷的保護作用并探討其保護機制方法：第一部分，P188對腦缺血再灌注損傷的保護作用采用大腦中動脈栓塞法建立小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，再灌注前尾靜脈單次注射不同劑量的P188，24小時后測定腦梗死體積(TTC染色法)，腦含水量以及神經(jīng)癥狀評分以評價短期保護作用。為進一步觀察P188的長期效應，小鼠尾靜脈注射P188后再每天單次腹腔注射P188，3周后評估小鼠的生存期，應用爬桿實驗和懸掛實驗測定肢體運動功能

3、，尼氏染色法測定腦萎縮。此外，體外建立海馬神經(jīng)細胞系(HT22)的糖氧剝奪模型，檢測P188對細胞活力和乳酸脫氫酶釋放的影響。第二部分，泊洛沙姆188對腦缺血保護作用的機制研究小鼠缺血再灌注損傷后，碘化丙啶(PI，非膜穿透性染料)側腦室注射應用熒光顯微鏡觀察細胞膜完整性。體外應用低濃度TritonX100輕度裂解細胞膜，觀察P188處理前后，細胞對碘化丙啶(紅色熒光)和SYl的X⑧Ghen(非膜穿透性染料，綠色熒光)兩種染料的通透性，探

4、討P188對細胞膜的直接修復作用。進一步，應用伊文思藍漏出實驗檢測小鼠缺血再灌注損傷后的血腦屏障的完整性，同時應用酶譜法和免疫印跡分析P188對基質金屬蛋白酶9的活性和表達的影響。此外，為了探討P188對細胞內(nèi)膜的影響，對P188進行銥配合物標記(自帶黃綠色熒光)，熒光顯微鏡觀察P188在HT22細胞和小鼠缺血再灌注后神經(jīng)細胞中的分布。在證實P188能穿透細胞膜后，分離出腦缺血再灌注組織的溶酶體或線粒體，westernblot檢測P18