洛沙坦對(duì)家兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、背景與目的：心臟缺血再灌注損傷的研究成果可以影響到冠心病、心肌梗死的治療、心臟直視手術(shù)中的心肌保護(hù)等多個(gè)領(lǐng)域，故一直是廣大基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)研究熱門的課題。近年來RAS尤其是Ang Ⅱ與心臟缺血再灌注損傷關(guān)系得到越來越多的重視,Ang Ⅱ包括心臟缺血后局部激活的RAS被認(rèn)為可以加重心臟缺血再灌注損傷。本實(shí)驗(yàn)以家兔心肌缺血再灌注損傷模型，觀察AngⅡ在缺血再灌注損傷中的作用和洛沙坦對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用。 方法： 1．動(dòng)物

2、實(shí)驗(yàn)： (1)參照Simpson法建立家兔心肌缺血/再灌注模型，以心電圖和心肌表面顏色變化確認(rèn)效果。 (2)頸動(dòng)脈介入法于不同時(shí)相觀察LVSP、LVDP、左心室收縮/舒張最快速度(±dp/dtmax)，考察缺血再灌注對(duì)心功能的影響，以及洛沙坦拮抗心功能受損的特征。 (3)用比色法測(cè)定實(shí)驗(yàn)過程中心肌酶釋放的量。 (4)放射免疫分析考察心肌缺血再灌注對(duì)血漿和心肌局部AngⅡ含量的影響。 (5)生物發(fā)光

3、法檢測(cè)缺血再灌注損傷的心肌細(xì)胞內(nèi)ATP含量變化以及洛沙坦對(duì)此變化的拮抗作用。 2．細(xì)胞實(shí)驗(yàn): (1)原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，通過缺氧復(fù)氧來模擬在體缺血再灌注。 (2)測(cè)定缺氧復(fù)氧過程中培養(yǎng)心肌細(xì)胞心肌酶釋放的量和心肌細(xì)胞內(nèi)ATP含量變化，方法同動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 (3)電子顯微鏡下觀察缺氧復(fù)氧條件下培養(yǎng)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化以及洛沙坦對(duì)超微結(jié)構(gòu)損傷的保護(hù)作用。 結(jié)果： 1．動(dòng)物實(shí)驗(yàn): (1)家

4、兔心肌缺血40分鐘再灌注2小時(shí)后LVSP、dp/dtmax、-dp/dtmax分別由對(duì)照組的101.81mmHg、3822.12mmHg/s、-2985.67mmHg/s變?yōu)?0.48mmHg、1306.24mmHg/s、-671.17mmHg/s，血漿中的AngⅡ高達(dá)對(duì)照組的6.22倍。 (2)家兔缺血再灌注過程中，血漿中CK、LDH濃度逐漸升高，心肌組織中的ATP含量逐漸降低，再灌注2小時(shí)后，血漿中CK、LDH濃度分別是再灌

5、注5分鐘的3.57、1.69倍，心肌組織中的ATP在再灌注2小時(shí)僅為再灌注5分鐘的67.95％。 (3)手術(shù)組血漿中的AngⅡ從再灌注開始即有顯著升高，隨再灌注過程呈持續(xù)上升，再灌注2小時(shí)Ⅱ組高達(dá)對(duì)照組的6.22倍，差異顯著，(P<0.01)；但是心肌組織中的AngⅡ變化不如血漿中的AngⅡ變化明顯，再灌注2小時(shí)手術(shù)組也僅升至對(duì)照組的2.70倍。 (4)不同劑量的洛沙坦呈劑量依賴性地拮抗心功能的降低，高劑量洛沙坦組再灌注

6、2小時(shí)后LVSP、dp/dtmax、-dp/dtmax分別為88.73mmHg、3442.74mmHg/s、-2500.33mmHg/s。 (5)洛沙坦組血漿中的CK、LDH在再灌注過程中亦有所升高，但隨著洛沙坦劑量的增高，其升高的幅度減小，如再灌注2小時(shí)手術(shù)組血漿中的LDH是低劑量組的1.21倍、中劑量組的1.36倍、高劑量組的1.64倍。 (6)隨著洛沙坦劑量的增高，再灌注過程中其血漿中AngⅡ的升高逐漸減緩，再灌注

7、2小時(shí)，高劑量組是低劑量組的1/2；心肌組織中的AngⅡ變化卻有所不同：隨著洛沙坦劑量的增高(0～20mg/kg)，心肌組織的AngⅡ亦逐漸增多，再灌注40分鐘時(shí)，中劑量組是低劑量組的1.42倍(7)洛沙坦組隨著洛沙坦劑量的增高，其ATP含量亦逐漸升高，比如再灌注2小時(shí)，中劑量組顯著高于低劑量組(P<0.01)，高劑量組顯著高于中劑量組(P<0.05)。 2．細(xì)胞實(shí)驗(yàn): (1)缺氧復(fù)氧組心肌細(xì)胞所釋放的CK、LDH從復(fù)氧

8、開始即有明顯升高，并不斷上升，復(fù)氧2小時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，分別是對(duì)照組的6.4、6.5倍；添加了AngⅡ的組，其心肌酶的升幅更大，CK、LDH于復(fù)氧2小時(shí)分別是對(duì)照組的7.33、8.15倍；細(xì)胞內(nèi)ATP含量明顯減少，和對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，而加了AngⅡ的3組和1組相比差異更加顯著(p<0.01)， (2)對(duì)照組心肌細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)完整，缺氧復(fù)氧注組線粒體腫脹，缺氧復(fù)氧+AngⅡ組可見染色體濃縮，核膜下

9、聚集，核膜皺縮，線粒體不僅有髓樣結(jié)構(gòu)，還形成自噬溶酶體。 (3)應(yīng)用了洛沙坦的組隨著洛沙坦劑量的升高，復(fù)氧過程中CK、LDH的升高逐漸減緩，復(fù)氧2小時(shí)高劑量組LDH、CK分別為缺氧復(fù)氧組的89.81％、51.91％。 (4)Losartan組隨著洛沙坦劑量的提高，細(xì)胞內(nèi)ATP含量逐漸升高，高劑量洛沙坦組的細(xì)胞內(nèi)ATP含量已比Ⅱ組高12.53％；自噬溶酶體消失，髓樣結(jié)構(gòu)減少，直至無線粒體膜破裂或髓樣結(jié)構(gòu)，偶見空泡形成。

10、 結(jié)論： 1．MRI的過程中左心室收縮和舒張功能降低，血漿和心肌局部組織中AngⅡ含量增加，其濃度與LVSP、dp/dtmax呈負(fù)相關(guān)，與LVDP、-dp/dtmax呈正相關(guān)，說明MRI有可能是AngⅡ所造成。 2．洛沙坦明顯保護(hù)MRI家兔心功能并降低心肌酶的釋放和維持心肌細(xì)胞內(nèi)ATP濃度，可能通過拮抗AngⅡ 1型受體來抵御MRI發(fā)揮心肌保護(hù)作用。 3．體外實(shí)驗(yàn)揭示了缺氧復(fù)氧可造成心肌細(xì)胞損傷，AngⅡ可加