聯(lián)合應(yīng)用CD40L單克隆抗體和未成熟樹突狀細(xì)胞對小腸移植免疫耐受的實驗研究.pdf

1、目的：研究供體骨髓來源的未成熟樹突狀細(xì)胞(imDC)聯(lián)合CD40L單克隆抗體(CD40LmAb)誘導(dǎo)同種異體大鼠節(jié)段性小腸移植免疫耐受中的作用。 方法：190只SD大鼠施行異位節(jié)段性小腸移植，手術(shù)顯微鏡下門靜脈-下腔靜脈端側(cè)吻合、腹主動脈端側(cè)吻合建立同種異體大鼠節(jié)段性小腸移植模型；分離供體大鼠骨髓來源DC細(xì)胞前體，經(jīng)GM-CSF、IL-4體外刺激培養(yǎng)6天后，檢測細(xì)胞表面共刺激分子及MHC表達，鑒定是否為imDC；實驗動物隨機分為

2、3組，每組15對，進行不同預(yù)處理后進行小腸移植。A陰性對照組，受體不經(jīng)任何處理，即行小腸移植術(shù)；B組：小腸移植前7天，每只受體經(jīng)陰莖背靜脈注射供體的未成熟DC，細(xì)胞數(shù)為2×106個；C組：小腸移植前7天，每只受體經(jīng)陰莖背靜脈注射供體的未成熟DC，細(xì)胞數(shù)為2×106個。同時腹腔注射CD40LmAb200ug/只。B、C組1周后行大鼠異位節(jié)段性小腸移植術(shù)。觀察：1、大鼠移植后存活情況；2、移植后3、5、7、14天移植腸病理學(xué)情況；3、同時T

3、UNNEL法檢測移植腸的細(xì)胞凋亡情況。4、移植后3、5、7、14天取受體血清，檢測TH1、TH2細(xì)胞因子IL-2、IL-10和INF-a的濃度。 結(jié)果：采用近交系SD大鼠建立大鼠同種同基因大鼠節(jié)段性小腸移植模型，共實施手術(shù)95次，50次為預(yù)實驗，預(yù)試驗手術(shù)成功率54﹪。45次正式實驗，正式實驗手術(shù)成功率為86.7﹪。其中供體平均手術(shù)時間(60±10)min，受體平均手術(shù)時間為(90±15)min，其中動脈吻合(15±5)min，

4、靜脈吻合(8±5)min。移植腸溫缺血時間(移植腸脫離低溫保存狀態(tài)至血運恢復(fù)的時間)(28±5)min，冷缺血時間控制在30min以內(nèi)；采用GM-CSF+IL-4培養(yǎng)的骨髓來源的未成熟DC的共刺激分子和MHC表達水平為，與成熟DC差異有顯著性；聯(lián)合應(yīng)用imDC+CD40LmAb組大鼠小腸移植后存活時間延長，中位生存時間為21天，而單純小腸移植組中位生存時間僅為7天，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)； 聯(lián)合應(yīng)用imDC+CD40L

5、mAb組移植小腸和脾臟炎性細(xì)胞浸潤、黏膜結(jié)構(gòu)破壞程度和黏膜細(xì)胞的凋亡數(shù)目明顯低于imDC組和對照組(P＜0.05)。同時結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植后第3、5、7天imDC+CD40LmAb組大鼠Th1細(xì)胞因子IL-2、IFN-r明顯降低，而Th2細(xì)胞因子IL-10明顯升高，與imDC組及對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：1、改進方法后在顯微外科基礎(chǔ)上能夠建立穩(wěn)定的大鼠節(jié)段性小腸移植模型。2、術(shù)前輸注供體來源的未成熟DC聯(lián)