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文檔簡介
1、目的:研究供體骨髓來源的未成熟樹突狀細胞(imDC)聯(lián)合CD40L單克隆抗體(CD40LmAb)誘導同種異體大鼠節(jié)段性小腸移植免疫耐受中的作用。 方法:190只SD大鼠施行異位節(jié)段性小腸移植,手術顯微鏡下門靜脈-下腔靜脈端側吻合、腹主動脈端側吻合建立同種異體大鼠節(jié)段性小腸移植模型;分離供體大鼠骨髓來源DC細胞前體,經(jīng)GM-CSF、IL-4體外刺激培養(yǎng)6天后,檢測細胞表面共刺激分子及MHC表達,鑒定是否為imDC;實驗動物隨機分為
2、3組,每組15對,進行不同預處理后進行小腸移植。A陰性對照組,受體不經(jīng)任何處理,即行小腸移植術;B組:小腸移植前7天,每只受體經(jīng)陰莖背靜脈注射供體的未成熟DC,細胞數(shù)為2×106個;C組:小腸移植前7天,每只受體經(jīng)陰莖背靜脈注射供體的未成熟DC,細胞數(shù)為2×106個。同時腹腔注射CD40LmAb200ug/只。B、C組1周后行大鼠異位節(jié)段性小腸移植術。觀察:1、大鼠移植后存活情況;2、移植后3、5、7、14天移植腸病理學情況;3、同時T
3、UNNEL法檢測移植腸的細胞凋亡情況。4、移植后3、5、7、14天取受體血清,檢測TH1、TH2細胞因子IL-2、IL-10和INF-a的濃度。 結果:采用近交系SD大鼠建立大鼠同種同基因大鼠節(jié)段性小腸移植模型,共實施手術95次,50次為預實驗,預試驗手術成功率54﹪。45次正式實驗,正式實驗手術成功率為86.7﹪。其中供體平均手術時間(60±10)min,受體平均手術時間為(90±15)min,其中動脈吻合(15±5)min,
4、靜脈吻合(8±5)min。移植腸溫缺血時間(移植腸脫離低溫保存狀態(tài)至血運恢復的時間)(28±5)min,冷缺血時間控制在30min以內;采用GM-CSF+IL-4培養(yǎng)的骨髓來源的未成熟DC的共刺激分子和MHC表達水平為,與成熟DC差異有顯著性;聯(lián)合應用imDC+CD40LmAb組大鼠小腸移植后存活時間延長,中位生存時間為21天,而單純小腸移植組中位生存時間僅為7天,有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05); 聯(lián)合應用imDC+CD40L
5、mAb組移植小腸和脾臟炎性細胞浸潤、黏膜結構破壞程度和黏膜細胞的凋亡數(shù)目明顯低于imDC組和對照組(P<0.05)。同時結果發(fā)現(xiàn)移植后第3、5、7天imDC+CD40LmAb組大鼠Th1細胞因子IL-2、IFN-r明顯降低,而Th2細胞因子IL-10明顯升高,與imDC組及對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論:1、改進方法后在顯微外科基礎上能夠建立穩(wěn)定的大鼠節(jié)段性小腸移植模型。2、術前輸注供體來源的未成熟DC聯(lián)
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