未成熟樹突狀細(xì)胞局部回輸治療誘導(dǎo)同種異體復(fù)合組織移植耐受的研究.pdf

1、近年來,隨著新型免疫抑制藥物的問世及組織配型技術(shù)的精進(jìn),移植外科發(fā)展迅猛,整形外科醫(yī)生也加強(qiáng)了在異體復(fù)合組織移植領(lǐng)域的探索。然而,CTA移植的發(fā)展遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于內(nèi)臟器官移植,究其根本,是因為其組分復(fù)雜,抗原性不均一。自1998年Dubernard首次成功實施手移植以來,截止07年全球已完成20例手移植,8例換臉。據(jù)文獻(xiàn)回顧,法國的第一例CTA受者在術(shù)后發(fā)生過2次急性排斥反應(yīng),本研究所實施的第二例患者也發(fā)生了3次急排。在加大免疫抑制劑用量后,

2、排斥反應(yīng)均得到控制,但代價卻是各種棘手的并發(fā)癥,急性腎衰、高血壓癥、高血糖、白細(xì)胞減少癥等等。因此,如何最小化免疫抑制劑應(yīng)用的風(fēng)險,已成為CTA移植領(lǐng)域的重中之重。異體復(fù)合組織移植排斥反應(yīng)的發(fā)生遵循著免疫應(yīng)答的一般規(guī)律,即首先對外來的同種異體抗原進(jìn)行免疫識別,繼而進(jìn)入活化階段,最終產(chǎn)生對移植物的免疫排斥,因此,選擇性阻斷其中任一環(huán)節(jié),均有可能誘導(dǎo)移植免疫耐受。樹突狀細(xì)胞是最主要的抗原提呈細(xì)胞,其表面高水平表達(dá)MHC-II類分子以及共刺激

3、分子CD80、CD86,通過第二信號刺激途徑,激活初始T細(xì)胞。但是在它成熟之前,這些分子呈低表達(dá),以吞噬功能為主,提呈功能為輔,甚至可以誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡或者無能。因此,未成熟樹突狀細(xì)胞是細(xì)胞回輸治療方案理想的備選細(xì)胞。
　　目的:利用CTA移植物位于體表,耐缺血時間長的優(yōu)勢,利用術(shù)中、術(shù)后兩個時間窗,提出局部細(xì)胞治療誘導(dǎo)免疫耐受的新理念,降低全身免疫抑制劑應(yīng)用為同種異體復(fù)合組織移植帶來的風(fēng)險。
　　方法:1.貼壁培養(yǎng)法體外誘導(dǎo)

4、未成熟樹突狀細(xì)胞,進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定、活性及表型鑒定,最后通過體外鑒定其免疫學(xué)功能。2.體內(nèi)試驗分別研究供、受雙方來源的imDC,局部回輸或聯(lián)合應(yīng)用低劑量雷帕霉素對異體皮瓣存活的影響。
　　結(jié)果:1.光鏡可見細(xì)胞呈葡萄串樣生長,電鏡下可看到細(xì)胞表面皺褶多、短刺狀突起少,胞內(nèi)可見豐富的細(xì)胞器及吞噬泡?；罴?xì)胞率(91.13±1.25)％,純度(61.10±1.47)％,OX62陽性細(xì)胞表面CD80、86、MHC II呈低表達(dá)。抑制功能試驗

5、表明imDC不具備直接刺激T細(xì)胞活化擴(kuò)增的能力。單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng),觀察到imDC下調(diào)了T細(xì)胞活化擴(kuò)增的能力。2.供體imDC回輸組最先發(fā)生急排,病理分析符合急排的病理特點。受體imDC回輸聯(lián)合低劑量雷帕霉素用藥后,皮瓣成活期延長至20余天,較雷帕霉素單獨處理組長,病理分析見皮膚、皮下以及血管周圍組織炎性細(xì)胞浸潤均明顯增多。排斥終點各組受鼠脾臟、淋巴結(jié)內(nèi)Treg含量檢測,供體imDC回輸組最低,受體imDC回輸聯(lián)合雷帕霉素組最高,但均