增液布津湯對(duì)干燥綜合征模型小鼠干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 利用免疫誘導(dǎo)法建立干燥綜合征(Sjogren'ssyndromeSS)動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)觀察增液布津湯對(duì)SS模型小鼠一般指標(biāo)及免疫功能的干預(yù)調(diào)節(jié)作用，并從分子細(xì)胞生物學(xué)角度觀察增液布津湯對(duì)SS模型小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素-6（IL-6）及頜下腺水通道蛋白-5(AQP5)的影響，為探討增液布津湯治療SS的作用機(jī)制提供基礎(chǔ)依據(jù)，明確其治療靶點(diǎn)，同時(shí)為更好地運(yùn)用于臨床提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：

2、
　　 1．理論研究方法：檢索古今中外文獻(xiàn)對(duì)干燥綜合征的中醫(yī)臨床辨證分型、治法方藥及實(shí)驗(yàn)研究方面的內(nèi)容進(jìn)行分析總結(jié)。
　　 2．實(shí)驗(yàn)研究方法：雌性BALB/c小鼠60只，隨機(jī)分為正常組對(duì)照組、模型組、增液布津湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和環(huán)戊硫酮組。除正常對(duì)照組外，其余5組均利用免疫誘導(dǎo)法（注射白百破疫苗+完全弗氏佐劑+SD大鼠頜下腺抗原）建立SS小鼠模型，造模后當(dāng)天正常對(duì)照組及模型組用生理鹽水20mL.kg-1ig，

3、中藥低、中、高劑量組用增液布津湯（相當(dāng)于生藥6.8、13.6、27.3g.kg-1）ig，陽(yáng)性對(duì)照組用環(huán)戊硫酮12.5mg.kg-1ig。首次免疫后第3，7天，用乳化抗原對(duì)模型組和用藥組加強(qiáng)免疫2次，劑量為0.2mL，多點(diǎn)背部sc。以后每隔14天用乳化抗原加強(qiáng)免疫1次，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束共加強(qiáng)免疫2次，劑量、方法同前兩次，正常對(duì)照組不作任何處理。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，動(dòng)態(tài)觀察增液布津湯對(duì)SS模型小鼠攝食量、飲水量、體質(zhì)量及唾液流量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)束第50

4、天，摘取各組小鼠頜下腺、胸腺、脾臟，計(jì)算頜下腺指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，同時(shí)鏡下觀察頜下腺病理變化，并用ELISA法，測(cè)定小鼠血清TNF-α、IL-6含量，用Western印跡法，測(cè)定頜下腺細(xì)胞AQP5蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．理論研究結(jié)果：在文獻(xiàn)資料分析的基礎(chǔ)上，我們認(rèn)為：中醫(yī)各家雖對(duì)該病從不同角度進(jìn)行了論治，但均是圍繞其本虛標(biāo)實(shí)的病理特點(diǎn)進(jìn)行辨證論治的。本虛即為諸臟腑氣血陰陽(yáng)虧虛，其中主要為陰液虧損，津枯液

5、涸，臟腑不榮，津液輸布失常；而標(biāo)實(shí)主要是燥毒、瘀毒互結(jié)。故根據(jù)氣、血、津液理論，擬用養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)的增液布津湯治療本病。
　　 2．實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果：
　　 2.1一般癥狀表現(xiàn)：與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠唾液流量減少、飲水量增加、攝食量減少、體重減輕。此外，正常對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)自如，皮毛光滑，無(wú)脫毛現(xiàn)象；模型鼠精神萎靡、嗜睡、懶動(dòng)、活動(dòng)度下降，皮毛光澤度下降，輕度脫毛，皮毛明顯疏松，部分小鼠尾部破

6、潰結(jié)痂，而增液布津湯能不同程度改善模型小鼠氣陰兩虛的癥狀，小鼠輕度脫毛，皮毛疏松不明顯。
　　 2.2鏡下觀察頜下腺形態(tài)結(jié)構(gòu)變化：模型鼠頜下腺組織出現(xiàn)不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、腺泡萎縮或消失、導(dǎo)管擴(kuò)張等病理變化，且頜下腺萎縮，頜下腺指數(shù)明顯減小，而增液布津湯能明顯減輕淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)并抑制頜下腺萎縮。
　　 2.3在免疫功能方面：與正常對(duì)照組相比，模型鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)均增加(P＜0.01，P＜0.05)，表明機(jī)體內(nèi)發(fā)生了較強(qiáng)

7、的免疫反應(yīng)，而給予藥物治療后，均能顯著減小模型鼠的脾指數(shù)，胸腺指數(shù)，故推測(cè)增液布津湯可以抑制機(jī)體內(nèi)增強(qiáng)的免疫反應(yīng)。
　　 2.4對(duì)細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的影響：與正常對(duì)照組相比，模型組TNF-α及IL-6含量明顯增高(P＜0.01)；與模型組相比，增液布津湯各劑量組TNF-α及IL-6含量均由不同程度降低(P＜0.01)。
　　 2.5Westernblot測(cè)定結(jié)果示：與正常對(duì)照組相比，模型組AQP5表達(dá)水平下降了

8、27.90％(p＜0.01)；與模型組相比，增液布津湯高、中、低劑量組AQP5表達(dá)水平分別升高了32.84%(p＜0.01)、12.54%(p＜0.05)、4.51%，環(huán)戊硫酮組AQP5表達(dá)水平升高了20.40%(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 增液布津湯可能通過(guò)抑制細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的分泌，間接地抑制了輔助性T細(xì)胞(Th)亞群增殖和分化，從而減輕免疫炎癥反應(yīng)，緩解SS模型鼠頜下腺淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡、導(dǎo)管

9、結(jié)構(gòu)及免疫器官的破壞，保護(hù)腺體的功能，促進(jìn)AQP5表達(dá)，增加唾液分泌，進(jìn)一步說(shuō)明細(xì)胞因子及AQP5在SS發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，同時(shí)，也表明養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)法的整體調(diào)節(jié)作用可有效緩解SS模型鼠氣陰兩虛的癥狀。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)：
　　 從氣陰兩虛的角度，研究養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)法對(duì)SS小鼠干預(yù)作用及其機(jī)理，得出該治法通過(guò)抑制細(xì)胞因子的分泌，減輕免疫炎癥反應(yīng)，保護(hù)腺體功能，促進(jìn)AQP5表達(dá)，增加唾液分泌，