人參皂甙Rg1預(yù)處理對(duì)Con A誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、[研究目的]
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究人參皂甙Rg1對(duì)Con A誘導(dǎo)肝損傷小鼠是否有保護(hù)作用并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 [研究方法]
　　 1.將C57BL健康雄性小鼠隨機(jī)分為4組:A組為生理鹽水對(duì)照組(NS組):尾靜脈注射生理鹽水100μl預(yù)處理，6h后通過尾靜脈注射100μl生理鹽水;B組為人參皂甙Rg1對(duì)照組（Rg1組）:尾靜脈注射人參皂甙Rg1(5mg/ml，100μl)預(yù)處理，6h后通過尾靜脈注射生理鹽

2、水100μl;C組為ConA對(duì)照組（ConA組）:尾靜脈注射生理鹽水100μl預(yù)處理，6h后通過尾靜脈注射Con A(4mg/ml，100μl);D組人參皂甙Rg1保護(hù)組(Rg1/ConA組):尾靜脈注射人參皂甙Rg1(5mg/ml，100μl)預(yù)處理，6h后通過尾靜脈注射Con A(4mg/ml，100μl)。
　　 2.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h，心臟采血，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)外周血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST

3、)濃度，評(píng)估肝損傷程度。
　　 3.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h，取肝臟組織，HE染色，病理切片觀察肝損傷。
　　 4.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h，心臟采血，ElISA法檢測(cè)外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平。
　　 5.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h，取肝臟組織，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表達(dá)水平。
　　 6.各組小鼠經(jīng)預(yù)

4、處理后18h，取肝臟組織，Westernblot法檢測(cè)肝臟p65、IκBα磷酸化水平。
　　 7.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h，心臟采血，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠肝臟、外周血及脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.Con A組小鼠外周血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)濃度顯著高于Rg1/ConA組、NS組及Rg1組（P均＜0.01）;而Rg1/ConA組與NS組及Rg1組之間差

5、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　 2.肝組織HE染色可見，ConA組小鼠肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，Rg1/ConA組肝臟病變較ConA組明顯減輕。病理評(píng)分結(jié)果顯示，ConA組與Rg1/ConA組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01），而Rg1/Con A組與NS組及Rg1組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　 3.與ConA組比較，Rg1/ConA組小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平明顯降低（P均＜0.

6、01）。
　　 4.與ConA組相比，Rg1/ConA組小鼠肝內(nèi)TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表達(dá)水平顯著降低（P均＜0.01）。
　　 5.與ConA組相比，Rg1/ConA組小鼠肝臟組織p65和IκBα磷酸化水平明顯降低。
　　 6.Rg1/Con A組小鼠肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤較Con A組顯著減少(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ConA組小鼠肝內(nèi)C

7、D8+T淋巴浸潤較其它組均有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05）。各組小鼠外周血及脾臟中CD4+、CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　 [結(jié)論]
　　 1.人參皂甙Rg1通過下調(diào)肝臟NF-κB的表達(dá)，進(jìn)一步抑制炎癥因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌，從而減輕肝臟組織的炎癥。
　　 2.人參皂甙Rg1減少CD4+T淋巴細(xì)胞在肝臟組織的浸潤，可能與其抑制粘附因子ICA