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文檔簡(jiǎn)介
1、[研究目的]
本實(shí)驗(yàn)旨在研究人參皂甙Rg1對(duì)Con A誘導(dǎo)肝損傷小鼠是否有保護(hù)作用并探討其可能的作用機(jī)制。
[研究方法]
1.將C57BL健康雄性小鼠隨機(jī)分為4組:A組為生理鹽水對(duì)照組(NS組):尾靜脈注射生理鹽水100μl預(yù)處理,6h后通過尾靜脈注射100μl生理鹽水;B組為人參皂甙Rg1對(duì)照組(Rg1組):尾靜脈注射人參皂甙Rg1(5mg/ml,100μl)預(yù)處理,6h后通過尾靜脈注射生理鹽
2、水100μl;C組為ConA對(duì)照組(ConA組):尾靜脈注射生理鹽水100μl預(yù)處理,6h后通過尾靜脈注射Con A(4mg/ml,100μl);D組人參皂甙Rg1保護(hù)組(Rg1/ConA組):尾靜脈注射人參皂甙Rg1(5mg/ml,100μl)預(yù)處理,6h后通過尾靜脈注射Con A(4mg/ml,100μl)。
2.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h,心臟采血,采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)外周血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST
3、)濃度,評(píng)估肝損傷程度。
3.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h,取肝臟組織,HE染色,病理切片觀察肝損傷。
4.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h,心臟采血,ElISA法檢測(cè)外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平。
5.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h,取肝臟組織,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表達(dá)水平。
6.各組小鼠經(jīng)預(yù)
4、處理后18h,取肝臟組織,Westernblot法檢測(cè)肝臟p65、IκBα磷酸化水平。
7.各組小鼠經(jīng)預(yù)處理后18h,心臟采血,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠肝臟、外周血及脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。
[結(jié)果]
1.Con A組小鼠外周血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)濃度顯著高于Rg1/ConA組、NS組及Rg1組(P均<0.01);而Rg1/ConA組與NS組及Rg1組之間差
5、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。
2.肝組織HE染色可見,ConA組小鼠肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重,Rg1/ConA組肝臟病變較ConA組明顯減輕。病理評(píng)分結(jié)果顯示,ConA組與Rg1/ConA組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01),而Rg1/Con A組與NS組及Rg1組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。
3.與ConA組比較,Rg1/ConA組小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平明顯降低(P均<0.
6、01)。
4.與ConA組相比,Rg1/ConA組小鼠肝內(nèi)TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表達(dá)水平顯著降低(P均<0.01)。
5.與ConA組相比,Rg1/ConA組小鼠肝臟組織p65和IκBα磷酸化水平明顯降低。
6.Rg1/Con A組小鼠肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤較Con A組顯著減少(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ConA組小鼠肝內(nèi)C
7、D8+T淋巴浸潤較其它組均有所升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。各組小鼠外周血及脾臟中CD4+、CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。
[結(jié)論]
1.人參皂甙Rg1通過下調(diào)肝臟NF-κB的表達(dá),進(jìn)一步抑制炎癥因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌,從而減輕肝臟組織的炎癥。
2.人參皂甙Rg1減少CD4+T淋巴細(xì)胞在肝臟組織的浸潤,可能與其抑制粘附因子ICA
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