白介素-6、gp130與Graves病關系研究.pdf

1、本論文分三部分，初步研究了白介素-6(IL-6)/gp130信號通路與Graves病(GD)的關系。 第一部分GD患者血清IL-6水平變化[目的]研究GD患者經抗甲亢藥物治療前后不同時期血清IL-6水平變化情況。 [材料與方法]1.對象及分組26例GD患者，其中有13例為初發(fā)期未治療組病人，追蹤隨訪至其抗甲亢治療維持期，另外13例為抗甲亢停藥后的GD病人，正常對照組為13例健康志愿者。 2.血清IL-6的測定空腹

2、狀態(tài)下采外周靜脈血，離心取血清。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對血清IL-6進行測定 3.統(tǒng)計學分析結果以均數(shù)±標準差(-x±s)表示。初發(fā)期組與維持期組采用配對t檢驗。其他各組間比較采用方差分析。p＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。 [結果]GD初發(fā)期患者其血清IL-6水平(2.52±1.30pg/ml)較對照組(1.44±0.59pg/ml)明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.009)；用藥治療至維持期血清IL-6水

3、平下降至1.53±0.96pg/ml，與初發(fā)期組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.002)；維持期組與對照組IL-6水平比較無顯著性差異；停藥組病人IL-6水平回升(2.42±1.07pg/ml)，與初發(fā)期組無顯著性差異，高于維持期組病人和正常對照組水平(P均＜0.05)。 [結論]GD患者血清IL-6水平變化規(guī)律：初發(fā)期明顯升高，應用抗甲狀腺藥物治療至維持期濃度下降，但至停藥期可能由于免疫損傷原因IL-6水平回升。 第二部

4、分Graves病外周血單個核細胞gP130mRNA的表達[目的]研究GD患者外周血單個核細胞(PBMCs)內gp130mRNA在抗甲亢藥物治療前后不同時期的表達情況。 [材料與方法]1.對象及分組同第一部分。2.PBMCs內gp130mRNA表達的檢測空腹采集外周靜脈血密度梯度離心分離制備新鮮PBMCs，用細胞原位雜交技術檢測GD患者及對照組PBMCs內gp130mRNA的表達。應用計算機圖像分析系統(tǒng)進行定量。 3.統(tǒng)計

5、學分析所得數(shù)據以均數(shù)±標準差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計分析，各組間比較采用方差分析。p＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。 [結果]1.顯微鏡下定性觀察：gp130mRNA原位雜交棕黃色陽性物質主要分布在細胞膜附近，胞漿著色較淺。GD初發(fā)期組病人外周血單個核細胞gp130mRNA雜交染色最深，可見濃染的團塊棕黃色顆粒；維持期組、停藥期組染色逐漸變淺，后者與正常對照組鏡下觀察大致相同。 2.原位雜交半定量分析顯示：正常對照組外

6、周血單個核細胞僅有少量的gp130mRNA表達(16.02±4.77)，GD患者gp130mRNA表達量較對照組高，其中初發(fā)期組病人表達量最高(28.51±6.63)，經治療至維持期gp130mRNA表達量明顯降低(22.25±2.92)，但仍較正常對照組高(P=0.015)；停藥組病人gp130mRNA表達量(17.98±8.01)與正常對照組比較無統(tǒng)計學意義，明顯低于初發(fā)組病人。 [結論]GD患者外周血單個核細胞內gp130

7、mRNA表達被激活，初發(fā)期組表達程度最高，隨甲亢治療好轉逐漸恢復至正常。 第三部分Graves病患者甲狀腺組織IL-6及其受體的表達[目的]研究GD患者甲狀腺組織內IL-6及其受體(gp80、gp130)的表達情況。 [材料與方法]1.對象及分組GD手術患者8例，對照組為8例甲狀腺功能正常的結節(jié)性甲狀腺腫或良性甲狀腺瘤患者。 2.RT-PCR檢測IL-6、gp80、gp130mPNA的表達含量GD組和對照組取術中

8、切除甲狀腺組織，提取RNA，RT-PCR檢測IL-6，gp80、gp130,以B-actin為內參，計算相對表達強度。 3.免疫組化檢測IL-6的表達甲狀腺組織石蠟切片行IL-6免疫組織化學染色，采用全自動圖像分析系統(tǒng)計算IL-6陽性單位表達值。 4.統(tǒng)計學分析所得數(shù)據以均數(shù)±標準差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計分析，各組間比較采用t檢驗。p＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。 [結果]1.甲狀腺組織IL-6、gp80、

9、gp130mRNA的表達8例GD患者中有6例甲狀腺組織內有明顯的IL-6mRNA表達，而對照組只有2例可見IL-6mRNA表達；GD組與對照組均檢測出gp80mRNA的表達；除對照組中有1例外，其他樣本均檢測出gp130mRNA表達。GD組甲狀腺組織內IL-6mRNA(0.1550±0.1137)、gp130mRNA(0.7556±0.1888)均較對照組的表達(0.0392±0.0741和0.5622±0.1211)升高，差異具有統(tǒng)計

10、學意義。gp80mRNA在兩組間的表達水平尚無顯著性差異。 2.甲狀腺組織IL-6免疫組化染色結果7例GD中甲狀腺濾泡細胞胞漿內有片狀、團塊狀IL-6表達，在浸潤的淋巴細胞內也可見IL-6陽性表達。8例對照組甲狀腺濾泡細胞內僅有4例有散在分布表達，且染色較淺，浸潤淋巴細胞無陽性表達。定量分析示：GD組IL-6水平較對照組升高(22.69±3.12vs19.62±2.32)，二者比較差別有統(tǒng)計學意義。(P=0.043) [