富氫HC-A腎保存液對(duì)大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討富氫HC-A腎保存液對(duì)大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：健康雄性Wistar大鼠24只，周齡8～10周，體重200～250 g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其隨機(jī)分為3組:對(duì)照組（H1組）大鼠僅切除右腎;普通腎保存液組（H2組）大鼠采用冷缺血再灌注模型，經(jīng)右腎動(dòng)脈穿刺置管，作為灌注道，經(jīng)右腎靜脈穿刺置管至左腎靜脈，作為流出道，于右側(cè)腎蒂上方和左側(cè)腎蒂下方同時(shí)阻斷腹主動(dòng)脈及下腔靜脈，用4℃普通HC-A腎

2、保存液經(jīng)右腎動(dòng)脈插管灌注左腎，用吸引器及時(shí)吸凈右腎靜脈插管流出的血和灌注液，完成灌注后切除右腎，將左腎置于裝有4℃HC-A腎保存液的容器中冷保存60 min，隨即恢復(fù)左腎血液灌注，沖洗腹腔后關(guān)腹;富氫腎保存液組（H3組）大鼠操作同H2組，灌注液及保存液換用自制的4℃富氫HC-A腎保存液。于再灌注24 h時(shí)抽取下腔靜脈血樣，測(cè)定血清BUN、Cr、TNF-α和IL-6濃度。切取左腎，取部分腎臟制成腎組織勻漿，測(cè)定腎組織MDA、8-OHdG的

3、含量及caspase-3活性。另取部分左腎組織用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切成4μm薄片，行HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織病理學(xué)結(jié)果，用Paller評(píng)分方法評(píng)估腎小管上皮細(xì)胞的損傷程度;TUNEL法檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：與H1組相比，H2和H3組大鼠血清BUN

4、、Cr、TNF-α和IL-6濃度均升高(P＜0.05)，腎組織MDA、8-OHdG含量及caspase-3活性均升高(P＜0.05);與H2組相比，H3組血清BUN、Cr、TNF-α和IL-6濃度均降低(P＜0.05)，腎組織MDA、8-OHdG的含量及caspase-3活性均降低(P＜0.05)。光鏡下，H1組腎組織未見(jiàn)明顯的病理學(xué)改變;H2組可見(jiàn)大量腎小管上皮細(xì)胞腫脹，有明顯的空泡形成，腎小管結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，管腔內(nèi)可見(jiàn)壞死脫落的上皮細(xì)

5、胞，基底膜暴露;H3組腎小管損傷較輕，以管腔擴(kuò)張為主，僅少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)有空泡形成。H2和H3組腎小管Paller評(píng)分明顯高于H1組(P＜0.05)，H3組腎小管Paller評(píng)分明顯低于H2組(P＜0.05)。H1組腎小管上皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯凋亡，H2組鏡下可見(jiàn)大量凋亡的腎小管上皮細(xì)胞，H3組凋亡的腎小管上皮細(xì)胞數(shù)目較H2組明顯減少。H2和H3組每高倍鏡視野下的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯高于H1組(P＜0.05)，H3組每高倍鏡視野下的凋亡細(xì)胞數(shù)則