四氫生物蝶呤對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討四氫生物蝶呤（BH4）對(duì)腎缺血再灌注損傷（IRI）的作用及其作用機(jī)制，分析一氧化氮（NO）在腎缺血再灌注損傷中的“雙面作用”。方法：90只Wistar大鼠隨機(jī)分為3組：⑴假手術(shù)組（n=30），按取材時(shí)間不同又分5個(gè)小組,即相當(dāng)于再灌注0h、1h、3h、6h和24h取材組，每組6只；⑵缺血再灌注（IR）模型組（n=30），組內(nèi)又分為再灌注0h、1h、3h、6h和24h 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只；⑶BH4處理組（BH4＋I(xiàn)R）（

2、n=30），組內(nèi)又分再灌注0h、1h、3h、6h和24h 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只。假手術(shù)組和模型組于麻醉前1h喂飼2ml蒸餾水，BH4處理組麻醉前1h喂飼等容積BH4（20mg/kg）。然后將各組動(dòng)物麻醉，開(kāi)腹：假手術(shù)組切除右腎，于上述相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取腎組織及血液標(biāo)本。模型組和BH4處理組切除右腎，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉左腎動(dòng)脈，60分鐘后松夾再灌注，并從再灌注0h、1h、3h、6h和24h各小組大鼠下腔靜脈取血3ml備測(cè)血尿素氮（BUN）和

3、血肌酐（Cr），同時(shí)取左腎組織迅速冷凍，作成10％勻漿，測(cè)定NO、NOS、髓過(guò)氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）。取三個(gè)組中的24h組部分腎組織用10％甲醛固定，制備石蠟切片，觀察腎組織學(xué)改變并進(jìn)行腎小管評(píng)分。結(jié)果：⑴腎組織NO含量變化：與假手術(shù)組比較，模型組再灌注1h，腎組織NO含量低于假手術(shù)組(P<0.05)；再灌注6h和24h組，高于假手術(shù)組(P<0.01)。而B(niǎo)H4處理組各時(shí)間點(diǎn)腎組織NO與假手術(shù)組比較無(wú)明顯變化（P＞0.05

4、），但與模型組比較再灌注1h升高(P<0.05)，再灌注6h、24h降低(P<0.01)。⑵各組腎組織NOS活性變化：除再灌0h組外，模型組其他各小組結(jié)構(gòu)型NOS（cNOS）活性均低于假手術(shù)組(P<0.05,P<0.01)，從再灌注3h開(kāi)始，模型組誘導(dǎo)型NOS（iNOS）活性高于假手術(shù)組(P<0.05,P<0.01)，至再灌注24h達(dá)最高；BH4處理組cNOS活性與假手術(shù)對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05），iNOS活性除再灌注24h組

5、高于假手術(shù)對(duì)照組外(P<0.05)，其他各小組均無(wú)顯著性差異。與IR模型組比較， BH4處理組cNOS活性除再灌注0h組外，均升高(P<0.05,P<0.01)，再灌注6h、24h組iNOS活性明顯降低(P<0.01)。⑶腎組織MDA、MPO及腎功能變化：與假手術(shù)組相比，模型組中腎組織MDA 、MPO活性和血Cr、BUN均有明顯升高；與模型組比較，BH4處理組中上述各指標(biāo)在多數(shù)再灌注時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的減輕。⑷腎臟組織學(xué)改變：模型組的腎