人臍帶血間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及向類肝細胞誘導分化的初步研究.pdf

1、背景:在本研究中，嘗試用簡便有效的細胞生物學技術，從人臍帶血中分離MSCs，并加以體外培養(yǎng)擴增，用人肝細胞株(L-02細胞株)的培養(yǎng)上清液體外誘導UCBMSCs向類肝細胞分化，期望在成體干細胞橫向分化中做一些基礎研究工作，并嘗試為臨床肝病的細胞移植療法等提供一種新的思路。 目的: 1.建立人臍帶血間充質(zhì)干細胞簡便有效的分離方法，并體外傳代培養(yǎng)擴增以獲得大量的人臍帶血間充質(zhì)干細胞； 2.觀察人臍帶血間充質(zhì)干細胞的細

2、胞生物學特性和細胞表型； 3.人肝細胞株L-02細胞的培養(yǎng)上清液體外誘導UCBMSCs向類肝細胞分化，并檢測分化細胞的生物學特征和細胞表型。 方法1.采用密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法分離UBCMSCs，DMEM(低糖)培養(yǎng)基加20％新生小牛血清原代及傳代培養(yǎng)，進行形態(tài)觀察，繪制原代生長曲線圖，應用FACScan流式細胞儀檢測細胞表面抗原表達情況，并用免疫組化的方法檢測細胞ALB和CK18的表達情況； 2.以體外傳

3、代培養(yǎng)的第3代細胞為研究對象，用人肝細胞株L-02的培養(yǎng)上清液進行誘導分化； 3.以未誘導的UCBMSCs和L-02細胞為對照，對誘導培養(yǎng)的細胞進行形態(tài)觀察，用免疫組化的方法檢測細胞ALB和CK18的表達情況，并應用FACScan流式細胞儀檢測細胞表面抗原表達情況。 結(jié)論: 1.密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法可在體外分離培養(yǎng)UBCMSCs，并可通過傳代培養(yǎng)大大提高MSCs純度，并具有良好的增殖能力；同時臍帶血來源廣