人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及神經(jīng)分化機制研究.pdf

1、目的:研究丹參誘導MSCs向神經(jīng)細胞分化的可能性及其可能的機制,為神經(jīng)細胞移植、臍帶組織庫的建立及中藥丹參作為神經(jīng)誘導劑提供理論依據(jù)。
　　方法:從人臍帶華爾通膠(Wharton's jelly)分離培養(yǎng)MSCs,丹參誘導人臍帶來源的MSCs向神經(jīng)細胞分化;用免疫細胞化學方法檢測神經(jīng)細胞相關(guān)蛋白標記的表達;用光鏡、掃描電子顯微鏡監(jiān)測丹參誘導后細胞形態(tài)改變;透射電子顯微鏡觀察丹參誘導后細胞超微結(jié)構(gòu)改變;用共聚焦顯微鏡分析丹參誘導前后

2、細胞內(nèi) DNA、RNA含量改變及神經(jīng)干細胞的標記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標記β-Ⅲ類神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)表達含量變化。
　　結(jié)果:從人臍帶華爾通膠分離、培養(yǎng)的貼壁細胞,體外生長形態(tài)類似于成纖維細胞,可以維持在未分化狀態(tài)穩(wěn)定增殖,體外增殖超過10代,細胞凍存一個月后復(fù)蘇,生長特點與凍存前基本一致。丹參可誘導人臍帶 MSCs向神經(jīng)樣細胞分化,分化的細胞表達神經(jīng)干細胞的標記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標記

3、β-Ⅲ類神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)。光鏡和掃描電鏡發(fā)現(xiàn)丹參可誘導華爾通膠來源的MSCs發(fā)生形態(tài)改變,細胞形成神經(jīng)軸突樣和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。透射電鏡觀察到丹參誘導后的MSCs呈分化成熟表現(xiàn),細胞器明顯增多,可見類似于神經(jīng)細胞樣的尼氏體樣結(jié)構(gòu)。用共聚焦顯微鏡檢測到丹參誘導前后細胞內(nèi)核酸合成代謝改變,誘導后DNA合成增多、RNA減少。通過熒光像素分析,誘導后的MSCs神經(jīng)干細胞的標記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標記β-Ⅲ類神經(jīng)微管(β

4、-TubulinⅢ)表達明顯增加。
　　結(jié)論:人臍帶含有豐富的MSCs,易于培養(yǎng)擴增,丹參能誘導人臍帶來源的MSCs能分化為神經(jīng)樣細胞。丹參誘導后的MSCs不僅有神經(jīng)樣的形態(tài)學改變,細胞超微結(jié)構(gòu)呈分化成熟表現(xiàn), DNA增多、RNA減少。誘導后的MSCs神經(jīng)干細胞的標記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標記β-Ⅲ類神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)表達明顯增加。本研究證實人臍帶華爾通膠來源的MSCs可能成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)細胞移植的一個