人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及神經(jīng)分化機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究丹參誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的可能性及其可能的機(jī)制,為神經(jīng)細(xì)胞移植、臍帶組織庫(kù)的建立及中藥丹參作為神經(jīng)誘導(dǎo)劑提供理論依據(jù)。
　　方法:從人臍帶華爾通膠(Wharton's jelly)分離培養(yǎng)MSCs,丹參誘導(dǎo)人臍帶來(lái)源的MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化;用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)蛋白標(biāo)記的表達(dá);用光鏡、掃描電子顯微鏡監(jiān)測(cè)丹參誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)改變;透射電子顯微鏡觀察丹參誘導(dǎo)后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;用共聚焦顯微鏡分析丹參誘導(dǎo)前后

2、細(xì)胞內(nèi) DNA、RNA含量改變及神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標(biāo)記β-Ⅲ類(lèi)神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)表達(dá)含量變化。
　　結(jié)果:從人臍帶華爾通膠分離、培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞,體外生長(zhǎng)形態(tài)類(lèi)似于成纖維細(xì)胞,可以維持在未分化狀態(tài)穩(wěn)定增殖,體外增殖超過(guò)10代,細(xì)胞凍存一個(gè)月后復(fù)蘇,生長(zhǎng)特點(diǎn)與凍存前基本一致。丹參可誘導(dǎo)人臍帶 MSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化,分化的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標(biāo)記

3、β-Ⅲ類(lèi)神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)。光鏡和掃描電鏡發(fā)現(xiàn)丹參可誘導(dǎo)華爾通膠來(lái)源的MSCs發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞形成神經(jīng)軸突樣和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。透射電鏡觀察到丹參誘導(dǎo)后的MSCs呈分化成熟表現(xiàn),細(xì)胞器明顯增多,可見(jiàn)類(lèi)似于神經(jīng)細(xì)胞樣的尼氏體樣結(jié)構(gòu)。用共聚焦顯微鏡檢測(cè)到丹參誘導(dǎo)前后細(xì)胞內(nèi)核酸合成代謝改變,誘導(dǎo)后DNA合成增多、RNA減少。通過(guò)熒光像素分析,誘導(dǎo)后的MSCs神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標(biāo)記β-Ⅲ類(lèi)神經(jīng)微管(β

4、-TubulinⅢ)表達(dá)明顯增加。
　　結(jié)論:人臍帶含有豐富的MSCs,易于培養(yǎng)擴(kuò)增,丹參能誘導(dǎo)人臍帶來(lái)源的MSCs能分化為神經(jīng)樣細(xì)胞。丹參誘導(dǎo)后的MSCs不僅有神經(jīng)樣的形態(tài)學(xué)改變,細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)呈分化成熟表現(xiàn), DNA增多、RNA減少。誘導(dǎo)后的MSCs神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記巢蛋白(nestin),神經(jīng)元的蛋白標(biāo)記β-Ⅲ類(lèi)神經(jīng)微管(β-TubulinⅢ)表達(dá)明顯增加。本研究證實(shí)人臍帶華爾通膠來(lái)源的MSCs可能成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞移植的一個(gè)