甘露糖對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎及腸粘膜屏障損傷的保護(hù)作用.pdf

1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是臨床上常見的一類急腹癥，是一種發(fā)病急、病情進(jìn)展快、并發(fā)癥多，并伴有極高死亡率的嚴(yán)重疾病。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全清楚。
　　 在急性胰腺炎中，胰腺壞死的程度并不是決定疾病預(yù)后的唯一因素，胰腺的繼發(fā)感染也起著重要的決定作用，而繼發(fā)感染通常是由細(xì)菌通過受損腸粘膜移位引起的。研究發(fā)現(xiàn)，SAP時(shí)腸粘膜上皮細(xì)胞間的緊密連接被破壞，腸道細(xì)菌、內(nèi)毒素進(jìn)入體循環(huán)導(dǎo)

2、致腸源性內(nèi)毒素血癥，刺激已經(jīng)活化的單核-巨噬細(xì)胞，釋放過量的細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，加速敗血癥的進(jìn)程，促使全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)的發(fā)生，對(duì)胰腺等臟器構(gòu)成嚴(yán)重的“第二次打擊”，甚至誘發(fā)和加重多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，最后甚至引起死亡。因此，改善腸道的屏障功能可能是預(yù)防或改善SA

3、P誘導(dǎo)的腸道功能障礙的新對(duì)策。Occludin蛋白作為緊密連接上的主要蛋白之一，其功能狀態(tài)對(duì)上皮/內(nèi)皮通透性變化起著重要調(diào)控作用，對(duì)維持緊密連接基本結(jié)構(gòu)和功能起到重要作用，已成為當(dāng)前臨床疾病治療的重要靶點(diǎn)。
　　 隨著糖生物學(xué)、糖化學(xué)等的發(fā)展，許多糖類的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用被發(fā)現(xiàn)。目前研究發(fā)現(xiàn)甘露糖在人體內(nèi)具有抗炎，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，加速傷口愈合，抑制腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，增加癌癥存活率等生理效應(yīng)。那么甘露糖對(duì)急性胰腺炎及其誘導(dǎo)的腸粘膜屏障功

4、能損傷有無保護(hù)作用，目前國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。
　　 目的:通過構(gòu)建SAP大鼠模型，觀察SAP發(fā)病早期腸道粘膜屏障功能的變化情況以及腸道上皮緊密連接蛋白Occludin的蛋白及mRNA表達(dá)變化，研究甘露糖對(duì)急性胰腺炎大鼠腸粘膜屏障損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:將60只SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)(SO)組、SAP組和甘露糖(MT)組，每組等分為6h、12h2個(gè)亞組，每組各10只，采用胰管內(nèi)逆行注射5％牛磺膽酸

5、鈉的方法制作動(dòng)物模型。分別于造模后6h、12h留取血、胰腺、回腸組織，通過HE染色觀察胰腺、腸道的病理變化，檢測(cè)血漿內(nèi)毒素和D-乳酸以評(píng)價(jià)腸粘膜通透性，采用RT-PCR、Westem-blot的方法觀察比較三組腸粘膜上皮Occludin蛋白及mRNA的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果:(1)胰腺病理評(píng)分:HE染色觀察，SO組大鼠胰腺腺泡及胰島組織結(jié)構(gòu)清晰，偶有壞死細(xì)胞及出血灶，無炎癥細(xì)胞;SAP模型誘發(fā)后胰腺組織結(jié)構(gòu)紊亂，間質(zhì)水腫明顯，可

6、見腺泡細(xì)胞壞死，可見出血，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并隨著時(shí)間進(jìn)展而漸進(jìn)性加重;MT組胰腺組織結(jié)構(gòu)紊亂程度輕，小葉間有區(qū)域性水腫，可見壞死細(xì)胞及出血灶，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。病理學(xué)評(píng)分證實(shí)，所有SAP組（6h8.33±1.53;12h10.67±1.53）、MT組(6h4.33±0.58;12h6.33±1.53)各時(shí)間點(diǎn)胰腺病理學(xué)評(píng)分與SO組(6h0.67±0.58;12h2.33±1.16)比較，都有所升高（P＜0.05），其中SAP組升高更為顯著

7、(P＜0.01);MT組與SAP組各時(shí)間點(diǎn)比較，評(píng)分下降(P＜0.05)，12h組更為顯著(P＜0.01);但各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，無明顯差異(P＞0.05)。(2)腸道病理評(píng)分:HE染色觀察，SO組大鼠腸粘膜未見明顯損傷，腸粘膜上皮及絨毛形態(tài)完整（6h0.67±1.15;12h0.67±0.58）;SAP組和MT組腸粘膜可見不同程度的破壞，SAP組可見上皮細(xì)胞層壞死、脫落，部分絨毛脫落，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血（6h3.33±0.58;1

8、2h3.67±0.58），與SO組相比，評(píng)分明顯升高（P＜0.01）;MT組(6h1.33±0.58;12h1.33±0.58)較SAP組病理改變顯著減輕，絨毛排列基本整齊，固有層輕度水腫，無明顯細(xì)胞壞死（P＜0.05），MT組與SO組相比，雖然評(píng)分有所升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，無明顯差異(P＞0.05)。(3)血漿內(nèi)毒素水平(mmol/L×10-2):與SO組各時(shí)間點(diǎn)比較（6h12.22±0.88;

9、12h12.65±1.44），SAP組、MT組大鼠血漿內(nèi)毒素含量均明顯升高(P＜0.01);MT組（6h13.93±0.64;12h16.56±0.75）與SAP組（6h15.00±0.67;12h17.60±1.00）相比，均有下降(P＜0.05)各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，除SO組外，12h組均顯著高于6h組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。(4)血漿D-乳酸水平:與SO組各時(shí)間點(diǎn)（6h0.81±0.11;0.91±0.09）比較，SA

10、P組（6h1.20±0.12;12h1.33±0.15）大鼠血漿D-乳酸含量顯著升高(P＜0.01);MT組（6h0.98±0.07;12h1.10±0.12）與SO組相比，含量升高(P＜0.05);MT組與SAP組各時(shí)間點(diǎn)相比，D-乳酸含量均下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，除SO組外，其余兩組12hD-乳酸含量均高于6h(P＜0.05)。(5)RT-PCR檢測(cè)OccludinmRNA表達(dá)情況:SAP組和M

11、T組OccludinmRNA的量較SO組均下降，其中SAP組6h、12hmRNA的量分別為SO組的0.51±0.06，0.80±0.05倍;MT組分別是SO組的0.61±0.03，0.8±0.05倍，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著差異(P＜0.01);MT組6h、12h分別為SAP組的1.20±0.21，1.09±0.13倍有顯著差異(P＜0.05);SO組兩時(shí)間點(diǎn)相比無顯著差異(P＞0.05)，SAP組和MT組兩時(shí)間點(diǎn)相比，12hmRNA的量均高

12、于6h，且有顯著差異(P＜0.01)。(6)Westernblot檢測(cè)Occludin蛋白的表達(dá)情況:各組在65KD處可見特異性的蛋白條帶，隨著SAP進(jìn)展，腸道組織Occludin蛋白表達(dá)逐漸下降。SAP組(6h0.23±0.02;12h0.25±0.00)與SO組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)（6h0.36±0.02;12h0.36±0.01）相比，蛋白表達(dá)均明顯下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);MT組各時(shí)間點(diǎn)(6h0.30±0.01;12h0.33

13、±0.01)蛋白水平明顯低于SO組(P＜0.01)，與SAP組相比均上升（P＜0.05），其中6h上升顯著(P＜0.01);各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，MT組有差異（P＜0.05），其他兩組無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:(1)甘露糖能改善胰腺和腸道組織的病理變化;(2)甘露糖改善急性胰腺炎大鼠腸粘膜屏障損傷，降低腸粘膜的通透性，增加Occludin蛋白的表達(dá)，降低血漿D-酸和內(nèi)毒素水平;(3)甘露糖對(duì)急性胰腺炎腸粘膜屏障