雞傳染性貧血及四種免疫抑制病PCR診斷方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、雞傳染性貧血(chickeninfectiousanemia，CIA)是由雞傳染性貧血病毒(chickeninfectiousanemiavirus，CIAV)引起的傳染病，其主要危害是直接損害雞的造血器官和淋巴組織，從而引起免疫抑制，使雞對(duì)其它病原的易感性增加，導(dǎo)致患病雞群的發(fā)病和死亡，造成嚴(yán)重的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失。CIAV基因組編碼三種蛋白，其中VP3蛋白(又稱凋亡素)是目前已知的該病毒的唯一致病因子。因此，本研究根據(jù)CIAV基因組

2、的特點(diǎn)，參照有關(guān)資料，合成了一對(duì)擴(kuò)增整個(gè)VP3基因及部分VP1、VP2基因序列的引物，建立了用于CIA臨床診斷的PCR方法，并應(yīng)用該方法對(duì)安徽省該病的流行病學(xué)進(jìn)行研究，為準(zhǔn)確而詳實(shí)地掌握該病對(duì)安徽省養(yǎng)雞業(yè)的危害情況、分子流行病學(xué)及制定有效的疾病防制措施提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。同時(shí)在此基礎(chǔ)上建立了能同時(shí)診斷雞傳染性貧血(chickeninfectiousanemia，CIA)、馬立克氏病(Marek'sdisease，MD)、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生

3、癥(Reticuloendotheliosis，RE)、禽白血病(Avianleucosis，AL)等四種病毒性免疫抑制病的多重PCR方法，并將所建立的方法直接用于臨床上這四種免疫抑制病的診斷、流行病學(xué)及混合感染情況調(diào)查等的研究。 通過對(duì)常規(guī)DNA抽提方法進(jìn)行改進(jìn)，使整個(gè)診斷過程由原先的需時(shí)8個(gè)小時(shí)以上縮短為在5個(gè)小時(shí)內(nèi)完成，使該法具有快速、特異、敏感等優(yōu)點(diǎn)，能很好地滿足臨床快速診斷的需要。 應(yīng)用本課題所建立的PCR診斷

4、方法，對(duì)2003年9月～2005年3月期間來自安徽省65個(gè)雞群的185個(gè)病例共986份組織樣品進(jìn)行了CIAV的檢測(cè)，并對(duì)病例的主要臨床特征進(jìn)行調(diào)查記錄。CIAV檢測(cè)的結(jié)果表明，該病毒已在安徽省雞群中普遍存在，平均陽性率為25.95％；對(duì)不同品種、不同日齡雞的檢測(cè)結(jié)果表明，各種品種、不同日齡雞均可感染CIAV，其中以三黃雞陽性率最高；30日齡以內(nèi)雞只的發(fā)病率較高；不同器官的檢測(cè)表明，骨髓的檢出率最高。 應(yīng)用本課題所建立的多重PCR