雞傳染性貧血病毒Nested-PCR檢測方法的建立以及不同CIAV母源抗體水平對雞群保護率的影響.pdf

1、雞傳染性貧血病是一種由雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anaemia virus， CIAV）引起的一種臨床上以貧血、骨髓黃染、全身淋巴組織萎縮和免疫機能損害為主要特征的傳染病。在全球很多地方已經(jīng)普遍出現(xiàn)了感染CIAV的家禽，給雞群造成了極大地危害。除了垂直傳播和水平傳播外，使用了被CIAV污染的弱毒疫苗是其另一重要的傳播途徑之一，而通常其中污染的CIAV劑量較低，需要使用靈敏特異而又快速簡便的方法來檢測。除綜合

2、性生物安全措施外，通過多種途徑使雛雞獲得一定水平的母源抗體對于阻止CIAV的感染具有重要意義。本研究建立了針對CIAV的Nested-PCR方法用于弱毒疫苗中CIAV污染的檢測并與其它方法開展了對比，此外對不同滴度的母源抗體阻止CIAV感染和致病中的作用做了系統(tǒng)分析。
　　1．雞傳染性貧血病毒Nested-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用
　　疫苗中污染CIAV是造成CIAV感染的途徑之一，因此加強對禽弱毒疫苗中CIAV污染的監(jiān)測

3、對于種禽場防控CIAV極其重要，而通常疫苗中CIAV污染劑量較低，應(yīng)用一般的技術(shù)難以檢測到。為了檢測禽弱毒疫苗中CIAV的污染，本研究根據(jù)GenBank已發(fā)表的CIAV基因序列，針對其保守區(qū)設(shè)計了外用引物和內(nèi)用引物，通過優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)條件建立了檢測CIAV的Nested-PCR檢測方法。結(jié)果顯示，建立的檢測方法靈敏度高，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍。該方法與禽白血病病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒以及雞馬立克氏病毒等病毒基因均無交叉反

4、應(yīng)，具有很好的特異性。在模擬試驗中，該方法可以檢測到1000羽份弱毒疫苗中1個EID50的低劑量污染，應(yīng)用該方法從企業(yè)送檢的125批次的疫苗樣品共檢測出6個CIAV陽性樣品，從45份病料中共檢測出23個CIAV陽性性品，這與熒光定量PCR檢測以及PCR結(jié)合核酸斑點雜交檢測法檢測結(jié)果基本一致，可以作為這兩種方法的補充或替代，為不同實驗條件和技術(shù)水平的企業(yè)提供了更多實用性的選擇。
　　2．不同CIAV母源抗體水平對雞群保護率的影響

5、r>　　由于CIAV的感染在國內(nèi)較為普遍，種雞場大日齡雞的抗體陽性率較高，因此就可能通過垂直傳播使雛雞從母雞體內(nèi)獲得一定滴度的CIAV母源抗體，而母源抗體可以在一定程度上保護雛雞免受CIAV的感染，但是對于何種抗體水平可以抵抗多少病毒量的感染從未有任何觀察數(shù)據(jù)。本研究通過人工模擬試驗?zāi)M了不同CIAV母源抗體水平對雞群保護率的影響。通過對不同母源抗體滴度的1日齡海蘭褐雛雞分別按照150 EID50、700 EID50、1500 EID5

6、0劑量進行攻毒，觀察其每周的體重、紅細胞數(shù)目的變化情況，每周采集抗凝血后提取DNA檢測CIAV核酸，采集促凝血分離血清檢測CIAV抗體變化。結(jié)果顯示，對于母源抗體水平較高(15000)的雞來說，攻毒150 EID50后，體重變化和紅細胞數(shù)目較正常雞差異不顯著，血液中未檢測出CIAV核酸。CIAV抗體隨著日齡增長呈現(xiàn)下降狀態(tài)，在六周內(nèi)檢測CIAV抗體均為陽性，免疫器官指數(shù)與正常雞相比差異不顯著。攻毒700 EID50后，體重有輕微減輕的趨

7、勢，紅細胞數(shù)目在前四周出現(xiàn)明顯下降趨勢，只有個別雞血液檢測出現(xiàn)了CIAV核酸陽性，CIAV抗體滴度隨著日齡增長呈下降趨勢，在第6周左右接近抗體陽性臨界點，免疫器官指數(shù)與正常雞相比出現(xiàn)了差異。攻毒1500 EID50后，體重下降趨勢明顯，紅細胞數(shù)目在前四周急劇下降，部分雞只出現(xiàn)了CIAV核酸陽性，CIAV抗體滴度在第5周下降為陰性。對于母源抗體水平較低(7000)組的雞來說，在各項指標的檢測中相比于母源抗體水平較高的雞差異更為顯著，且高劑