四種甘草黃酮誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡作用研究.pdf

1、目的：測(cè)定四種甘草黃酮類化合物異甘草素、甘草素、異甘草苷、甘草苷的體外抗氧化活性，觀察四種化合物對(duì)人急性早幼粒白血病細(xì)胞株 HL-60的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，同時(shí)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧的變化。
　　 方法：采用化學(xué)方法測(cè)定四種化合物對(duì)羥自由基、DPPH、超氧陰離子的清除率及脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制率，評(píng)價(jià)其抗氧化活性。MTT(甲基噻唑基四唑)法確定四種化合物對(duì) HL-60細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度 IC50；臺(tái)盤蘭拒染法測(cè)定四種化合物對(duì)HL-60細(xì)

2、胞的致死率；AO/EB(吖啶橙/溴乙啶染料)染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。熒光探針 DCFH－DA 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(iROS)；熒光探針 DHE檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子水平；分光光度法測(cè)定GSH/GSSG的比率。
　　 結(jié)果：四種化合物都具有一定的抗氧化活性，但其抗氧化能力強(qiáng)弱不同：對(duì)DPPH和超氧陰離子的清除能力從大到小依次為異甘草苷，異甘草素，甘草素，甘草苷；對(duì)羥自由基和卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力從大到小依次

3、為異甘草素，異甘草苷，甘草素，甘草苷。通過(guò)對(duì)細(xì)胞活力、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、凋亡率的檢測(cè)，證實(shí)異甘草素明顯對(duì) HL-60細(xì)胞具有增殖抑制作用，并在一定作用濃度下(四種化合物在各自的IC50值和相同的摩爾濃度80μmol/L的作用下)可誘導(dǎo) HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，而其它三種化合物相同濃度下作用不顯著。異甘草素可顯著影響細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平，比其它三種化合物作用明顯，同時(shí)與細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子的增加和GSH/GSSG

4、比值的降低這一趨勢(shì)是一致的。
　　 結(jié)論：比較四種化合物的藥理作用，異甘草素的抗氧化活性和抗腫瘤活性都比較明顯；抗氧化活性方面異甘草苷與異甘草素都具有較強(qiáng)活性，甘草素和甘草苷次之；抗腫瘤方面異甘草素大于甘草素，異甘草苷和甘草苷則較弱；這可能與它們的結(jié)構(gòu)有關(guān)。異甘草素具有顯著抗氧化作用，能夠抑制 HL-60細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡，其作用機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi) ROS的水平有關(guān)。異甘草素有望成為一種治療白血病的藥物。
　　 意義：為開(kāi)