葛根提取物誘導HL-60細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia AML)是造血干細胞的惡性克隆}生疾病。發(fā)病時骨髓中異常的原始細胞及幼稚細胞大量增殖，并廣泛浸潤肝，脾，淋巴結等各種臟器，使正常血細胞生成減少，產(chǎn)生相應的癥狀，主要臨床表現(xiàn)為貧血，出血，感染，肝脾淋巴結腫大和骨關節(jié)疼痛等征象。急}生白血病病程急，自然病程短?，F(xiàn)代醫(yī)學多采用誘導分化、聯(lián)合化療、骨髓移植等治療。
　　 細胞凋亡是基因控制下的細胞程序化死亡，在疾病發(fā)生，發(fā)

2、展中有重要作用。細胞凋亡受阻是急性白血病發(fā)病重要因素，因此，誘導白血病細胞凋亡是AML治療的重要手段之一。HL-60細胞作為細胞誘導分化或凋亡研究的模型已為人們所熟知，而Bcl-2基因、P53基因、死亡受體及其配體Fas/FasL都是與細胞凋亡密切相關的重要信號分子。
　　 血復康是江蘇省中醫(yī)院血液科于1989年根據(jù)中醫(yī)解毒活血法獨創(chuàng)的復方制劑，主要由青黛、莪術、葛根等中藥組方。臨床主要用于治療慢性粒細胞白血病(chronic

3、myelogenousleukemia，CML)、AML、骨髓增生異常綜合征等惡性血液病。課題組既往的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)：血復康能抑制K562細胞(人慢性粒細胞白血病紅白血病變細胞株)增殖及誘導細胞凋亡，目誘導凋亡的途徑不盡相同。本研究試圖從蛋白水平進一步研究血復康單藥成分葛根提取物葛根素和大豆甙元誘導HL-60細胞凋亡可能的分子機制。
　　 實驗目的：1.研究不同濃度的葛根素和大豆甙元對HL-60細胞凋亡的影響；2.細胞凋亡相關信號

4、分子Bcl-2、P53、Fas/FasL在蛋白表達水平的變化，分別探討葛根素和大豆甙元誘導HL-60細胞凋亡可能的分子機制。
　　 實驗方法：以HL-60細胞為研究對象，觀察①不同濃度葛根提取物葛根素(0mmol/L、0.125 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1mmol/L)作用48h后②不同濃度大豆甙元(0mmol/L、0.025 mmol/L、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.2

5、 mmol/L)作用48小時后，Hoechst33258染色檢測細胞凋亡；Annexin V-FITC/PI雙染法通過流式細胞儀檢測細胞凋亡率；Western blot檢測 Bel-2、P53、Fas/FasL蛋白的變化。
　　 實驗結果：1.Hoechst染色后熒光顯微鏡觀察顯示，分別以不同濃度葛根素和大豆甙元處理組處理HL-60細胞48小時后，便可檢測到核固縮及凋亡小體，且以最高濃度處理組最為明顯；2.流式細胞儀檢測細胞凋亡

6、率：分別以不同濃度葛根素和大豆甙元處理組處理HL-60細胞48小時后，細胞凋亡率與濃度呈正相關；3.Western blot結果：①葛根素和大豆甙元濃度依賴組Bcl-2蛋白均有高表達，葛根素不同濃度處理后bcl-2表達隨濃度依賴性下降，大豆甙元細Bcl-2蛋白表達無濃受依賴性關系；②不同濃度葛根素和大豆甙元處理HL-60細胞48小時后，F(xiàn)as、FasL蛋白均有不同程度的表達，較對照組Fas、FasL蛋白表達有所升高，但無濃度依賴性關系。