葛根提取物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia AML)是造血干細(xì)胞的惡性克隆}生疾病。發(fā)病時(shí)骨髓中異常的原始細(xì)胞及幼稚細(xì)胞大量增殖，并廣泛浸潤(rùn)肝，脾，淋巴結(jié)等各種臟器，使正常血細(xì)胞生成減少，產(chǎn)生相應(yīng)的癥狀，主要臨床表現(xiàn)為貧血，出血，感染，肝脾淋巴結(jié)腫大和骨關(guān)節(jié)疼痛等征象。急}生白血病病程急，自然病程短?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用誘導(dǎo)分化、聯(lián)合化療、骨髓移植等治療。
　　 細(xì)胞凋亡是基因控制下的細(xì)胞程序化死亡，在疾病發(fā)生，發(fā)

2、展中有重要作用。細(xì)胞凋亡受阻是急性白血病發(fā)病重要因素，因此，誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡是AML治療的重要手段之一。HL-60細(xì)胞作為細(xì)胞誘導(dǎo)分化或凋亡研究的模型已為人們所熟知，而Bcl-2基因、P53基因、死亡受體及其配體Fas/FasL都是與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的重要信號(hào)分子。
　　 血復(fù)康是江蘇省中醫(yī)院血液科于1989年根據(jù)中醫(yī)解毒活血法獨(dú)創(chuàng)的復(fù)方制劑，主要由青黛、莪術(shù)、葛根等中藥組方。臨床主要用于治療慢性粒細(xì)胞白血病(chronic

3、myelogenousleukemia，CML)、AML、骨髓增生異常綜合征等惡性血液病。課題組既往的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)：血復(fù)康能抑制K562細(xì)胞(人慢性粒細(xì)胞白血病紅白血病變細(xì)胞株)增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，目誘導(dǎo)凋亡的途徑不盡相同。本研究試圖從蛋白水平進(jìn)一步研究血復(fù)康單藥成分葛根提取物葛根素和大豆甙元誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡可能的分子機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.研究不同濃度的葛根素和大豆甙元對(duì)HL-60細(xì)胞凋亡的影響；2.細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)

4、分子Bcl-2、P53、Fas/FasL在蛋白表達(dá)水平的變化，分別探討葛根素和大豆甙元誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡可能的分子機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：以HL-60細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察①不同濃度葛根提取物葛根素(0mmol/L、0.125 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1mmol/L)作用48h后②不同濃度大豆甙元(0mmol/L、0.025 mmol/L、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.2

5、 mmol/L)作用48小時(shí)后，Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；Annexin V-FITC/PI雙染法通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；Western blot檢測(cè) Bel-2、P53、Fas/FasL蛋白的變化。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.Hoechst染色后熒光顯微鏡觀察顯示，分別以不同濃度葛根素和大豆甙元處理組處理HL-60細(xì)胞48小時(shí)后，便可檢測(cè)到核固縮及凋亡小體，且以最高濃度處理組最為明顯；2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡

6、率：分別以不同濃度葛根素和大豆甙元處理組處理HL-60細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞凋亡率與濃度呈正相關(guān)；3.Western blot結(jié)果：①葛根素和大豆甙元濃度依賴組Bcl-2蛋白均有高表達(dá)，葛根素不同濃度處理后bcl-2表達(dá)隨濃度依賴性下降，大豆甙元細(xì)Bcl-2蛋白表達(dá)無(wú)濃受依賴性關(guān)系；②不同濃度葛根素和大豆甙元處理HL-60細(xì)胞48小時(shí)后，F(xiàn)as、FasL蛋白均有不同程度的表達(dá)，較對(duì)照組Fas、FasL蛋白表達(dá)有所升高，但無(wú)濃度依賴性關(guān)系。