地塞米松對深低溫凍存角膜浸潤細胞的影響研究.pdf

1、本實驗結(jié)合液氮深低溫凍存技術(shù)與地塞米松預(yù)處理方法，研究其對角膜免疫原性影響情況及可能機制。 研究方法：選擇新鮮豬角膜，以13mm直徑環(huán)鉆制取角膜標本，依次放入四種冷凍保護液中冷平衡，“簡化四步法”程序降溫后放入液氮中保存，使用前40℃水浴復(fù)溫。地塞米松作用組以同法制備植片，前三步冷平衡同前，最后分別放入含0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.05mg/ml地塞米松保護液中4℃孵育18小時，再程序降溫液氮凍存。BALB/c小

2、鼠50只，隨機分為陽性對照組、程序凍存組、地塞米松程序凍存組Ⅰ、地塞米松程序凍存組Ⅱ和地塞米松程序凍存組Ⅲ，每組10只。各組角膜植入到BALB/c小鼠背部皮下，術(shù)后14天取出，做石蠟包埋，HE染色、CD25和FasL免疫組化染色，光鏡觀察。剩余角膜復(fù)溫后用于錐蘭-茜素紅染色，觀察內(nèi)皮細胞存活情況。 研究結(jié)果：術(shù)后14天剖取角膜植片，見植片與周圍組織粘連，植片明顯腫脹，半透明，色微黃。HE染色結(jié)果：新鮮組角膜植片全層有大量淋巴細胞

3、浸潤；程序凍存組角膜浸潤細胞較新鮮組減少，多位于內(nèi)皮和上皮層分布；地塞米松作用各組細胞浸潤數(shù)最少。免疫組化顯示：新鮮組植片CD25和FasL陽性浸潤細胞數(shù)最多，與程序凍存組、各地塞米松作用組比較有明顯統(tǒng)計學差異。程序凍存組CD25和FasL陽性浸潤細胞數(shù)多于各地塞米松作用組，比較有顯著性差異。各地塞米松作用組CD25和FasL陽性浸潤細胞數(shù)差異比較無統(tǒng)計學意義。內(nèi)皮細胞染色結(jié)果示：程序凍存組和地塞米松作用各組內(nèi)皮細胞存活率均超過90﹪，