地塞米松對(duì)深低溫凍存角膜浸潤(rùn)細(xì)胞的影響研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)結(jié)合液氮深低溫凍存技術(shù)與地塞米松預(yù)處理方法，研究其對(duì)角膜免疫原性影響情況及可能機(jī)制。 研究方法：選擇新鮮豬角膜，以13mm直徑環(huán)鉆制取角膜標(biāo)本，依次放入四種冷凍保護(hù)液中冷平衡，“簡(jiǎn)化四步法”程序降溫后放入液氮中保存，使用前40℃水浴復(fù)溫。地塞米松作用組以同法制備植片，前三步冷平衡同前，最后分別放入含0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.05mg/ml地塞米松保護(hù)液中4℃孵育18小時(shí)，再程序降溫液氮凍存。BALB/c小

2、鼠50只，隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組、程序凍存組、地塞米松程序凍存組Ⅰ、地塞米松程序凍存組Ⅱ和地塞米松程序凍存組Ⅲ，每組10只。各組角膜植入到BALB/c小鼠背部皮下，術(shù)后14天取出，做石蠟包埋，HE染色、CD25和FasL免疫組化染色，光鏡觀察。剩余角膜復(fù)溫后用于錐蘭-茜素紅染色，觀察內(nèi)皮細(xì)胞存活情況。 研究結(jié)果：術(shù)后14天剖取角膜植片，見(jiàn)植片與周圍組織粘連，植片明顯腫脹，半透明，色微黃。HE染色結(jié)果：新鮮組角膜植片全層有大量淋巴細(xì)胞

3、浸潤(rùn)；程序凍存組角膜浸潤(rùn)細(xì)胞較新鮮組減少，多位于內(nèi)皮和上皮層分布；地塞米松作用各組細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)最少。免疫組化顯示：新鮮組植片CD25和FasL陽(yáng)性浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)最多，與程序凍存組、各地塞米松作用組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。程序凍存組CD25和FasL陽(yáng)性浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)多于各地塞米松作用組，比較有顯著性差異。各地塞米松作用組CD25和FasL陽(yáng)性浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。內(nèi)皮細(xì)胞染色結(jié)果示：程序凍存組和地塞米松作用各組內(nèi)皮細(xì)胞存活率均超過(guò)90﹪，