通過RNA干涉（RNAi）阻止免疫應(yīng)答前狂犬病病毒感染的研究.pdf

1、本研究利用siRNA的干涉作用研究特異性siRNA對狂犬病病毒復(fù)制的抑制作用。針對翻譯狂犬病病毒糖蛋白(G)和核蛋白(N)的mRNA各設(shè)計出3對特異的siRNA的轉(zhuǎn)錄前體-小DNA分子，合成后克隆到載體pSiencer2.1-U6中，經(jīng)測序成功獲得了轉(zhuǎn)錄載體。然后將轉(zhuǎn)錄載體轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞。采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染兩種方式。獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BHK-21細(xì)胞后，按1％比例接種狂犬病病毒8202，48h后采用直接免疫熒光和RT-PCR檢測狂

2、犬病病毒的復(fù)制情況，結(jié)果表明：N19對狂犬病病毒復(fù)制的干擾效果最好；G69次之；G18、G21起到了一些干擾作用，但效果不明顯；N35、N38沒有干擾效果。瞬時轉(zhuǎn)染時同步接毒，48h后同樣采用直接免疫熒光檢測狂犬病病毒的復(fù)制情況，結(jié)果表明：瞬時轉(zhuǎn)染時siRNA的干擾效果不理想。將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的BHK-21-G69、BHK-21-N19細(xì)胞的裂解物和轉(zhuǎn)錄載體pSiencer2.1-U6-siRNA-G69、pSiencer2.1-U6-si