尿激酶熱敏脂質(zhì)體靶向溶栓作用的研究.pdf

1、目的:研究包裹尿激酶(UK)的熱敏脂質(zhì)體在體內(nèi)外血栓模型上的熱靶向溶栓效果。 背景:溶栓療法是治療血栓性疾病最為有效的方法，但臨床常用的溶栓劑缺乏組織特異性，不能選擇性地作用于病變部位，易引發(fā)出血或溶栓后血管再閉塞等問題。將溶栓藥物導(dǎo)向血栓部位，增加血栓局部藥物濃度，從而特異、局部、高效地溶解血栓是溶栓治療的一個研究熱點。脂質(zhì)體作為藥物載體有它獨特的優(yōu)點，但因其缺乏主動靶向性，易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)從循環(huán)中清除，不易達到病變

2、部位。為了克服脂質(zhì)體的缺點，可通過改變脂質(zhì)體的組分制成熱敏脂質(zhì)體來提高療效。熱敏脂質(zhì)體是一種能攜載藥物并且在一定溫度條件下釋放藥物的脂質(zhì)體。熱敏脂質(zhì)體能靶向聚集在加熱的病變部位，并在加熱部位釋放內(nèi)容藥物，因此可提高病變處藥物濃度，提高療效。目前熱敏脂質(zhì)體己被廣泛地用于腫瘤的實驗室研究，但未見其在溶栓方面的報道。本研究目的是為了探討熱敏脂質(zhì)體在血栓性疾病中靶向治療的可行性。 材料與方法: 1．尿激酶熱敏脂質(zhì)體制備：以1，2

3、-Distearoyl-sn-gly-ero-3-phospho-choline(DPPC)、膽固醇為脂質(zhì)體膜的原料，用反相蒸發(fā)法(RPE)法制備包裹UK的熱敏脂質(zhì)體。 2．血凝塊制備：取兔頸靜脈血制成長15mm，寬7mm，高6mm的條狀小血凝塊，重量為600-700mg。所制備的血凝塊一部分用于制備簡易體外溶栓模型，研究尿激酶熱敏脂質(zhì)體(UKTsL)的體外靶向溶栓效果；另一部分用于體外恒溫溶栓。 3．簡易體外溶栓模型：

4、細線一頭系住血凝塊中間部位，將系有細線的血凝塊由輸液管切口送入其膨隆部位內(nèi)，固定細線另一端并封閉切口，制備成簡易體外溶栓裝置。 4．體內(nèi)溶栓模型：用三氯化鐵(FeCl<,3>)法在兔頸總動脈上復(fù)制血栓模型，血壓降至最低點時，證明模型成功建立。 5．體內(nèi)外溶栓實驗：本實驗整體上分為體外溶栓和體內(nèi)溶栓。 (1)體外溶栓(各組溶栓時間均為120min)：體外溶栓進一步分為體外恒溫溶栓和體外靶向溶栓，后者用到了簡易體外溶栓模型。

5、體外恒溫溶栓部分，24個血凝塊分為PBS組，37℃尿激酶組，42℃-45℃尿激酶組，按組別將血凝塊置入溶栓液(37℃尿激酶組，42℃-45℃尿激酶組UK濃度均為750IU/ml)，在一定的溫度條件下進行恒溫水浴溶栓；體外靶向溶栓部分，32個簡易體外溶栓模型分別隨機分為陰性對照組(PBS組)、陽性對照組(UK組，UK濃度為750IU/ml)、尿激酶脂質(zhì)體組(UKL組，UK濃度為375 IU/ml)和UKTsL組(UK濃度為375 IU/m

6、l)，各組例數(shù)均為8，按組別輸入相應(yīng)的試劑。在體外溶栓實驗中，觀察溶栓前后血凝塊體積、結(jié)構(gòu)、溶栓劑顏色變化及實驗結(jié)束后測定血凝塊溶解率。 (2)體內(nèi)溶栓：32只新西蘭大白兔(首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)根據(jù)所加試劑不同分為PBS組、UK組(UK量為15萬IU/kg)、UKL組(UK量為7.5萬IU/kg)和UKTsL組(UK量為7.5萬IU/kg)，各組例數(shù)均為8。實驗中，用生理記錄儀連續(xù)60分鐘監(jiān)測頸動脈壓，觀察在體血栓處血管的變化

7、。實驗結(jié)束后，處死動物并取材，觀察頸動脈血栓溶解情況及心、肝、脾、肺和腎的肉眼及組織學(xué)變化。 結(jié)論: 用RPE法可制備出uKTsL。42℃加熱可增強UKTsL的溶栓效果，UKTsL組與UK組溶栓效果相似，但UKTsL組的UK用量僅為后者的1/2，且副作用減少。與同UK劑量的UKL組比較具有顯著的溶栓效果。42℃加熱對尿激酶的溶栓活性無影響。提示UKTsL具有較好的熱敏效應(yīng)，可用于實驗性血栓的靶向溶栓。UKTsL作為一種新