大黃苷元聯合尿激酶動脈溶栓對血栓栓塞性腦缺血大鼠

1、1大黃苷元聯合尿激酶動脈溶栓對血栓栓塞性腦缺血大鼠大黃苷元聯合尿激酶動脈溶栓對血栓栓塞性腦缺血大鼠神經細胞凋亡的影響神經細胞凋亡的影響?劉敬霞1李建生2王冬3劉軻2梁生旺2李寧2蘇靜2郭曉燕2孫捷2（1.寧夏醫(yī)科大學銀川750004；2.河南中醫(yī)學院老年醫(yī)學研究所鄭州450003；3.河南省洛陽市婦女兒童保健中心兒童醫(yī)院洛陽471000）[摘要]目的目的：探討大黃苷元聯合不同時間窗溶栓治療對腦缺血大鼠神經細胞凋亡的阻抑作用及其對相關調控

2、基因蛋白表達的影響。方法方法：大鼠隨機分為假手術組、模型組、尿激酶溶栓組（簡稱溶栓組）、大黃苷元組和聯合組（大黃苷元尿激酶組）。大鼠自體血栓結合線栓阻塞大腦中動脈制備血栓栓塞性腦缺血動物模型。大鼠分別于缺血后3h、6h、9h經導管由頸內動脈用尿激酶進行溶栓。動脈給尿激酶后24h，觀察大鼠腦組織病理改變；免疫組織化學法檢測神經細胞凋亡和凋亡相關基因蛋白BaxCaspase3和bcl2表達。結果結果：各模型組大鼠病理改變明顯，TUNEL細胞

3、增多、Bax和Caspase3表達增強、bcl2表達下調；各用藥組較模型組TUNEL細胞減少，6h和9h組Bax和Caspase3表達減弱、6h組bcl2表達上調；各組9h分別較其3h的TUNE細胞數增加、Bax增強、bcl2減弱；聯合組分別較單一用藥各時間組TUNEL細胞數減少、6h和9h組Bax及Caspase3表達減弱、bcl2表達上調。結論：腦缺血可使促凋亡基因Bax表達上調和抑凋亡基因bcl2下調，引起神經細胞凋亡，且隨缺血時

4、間延長而明顯。大黃苷元及溶栓可下調Bax和Caspase3、上調bcl2表達，對腦缺血神經細胞凋亡有阻抑作用，以二者聯合用藥的效果尤為理想。[關鍵詞關鍵詞]腦缺血；大鼠；溶栓；大黃苷元；聯合；細胞凋亡InfluenceofRhubarbAglyconeAssociatedThrombolysisonNeurocyteApoptosisinRatswithThrombusoccludedCerebralIschemiaLIUJingxia

5、1LIJiansheng2WANGDong3LIUKe2LIANGShengwang2LINing2SUJing2GUOXiaoyan2SUNJie2（1.NingxiaMedicalUniversityYinchuan750004China.2.GeriatricsInstituteofHenanCollegeofTraditionalChineseMedicineZhengZhou450003China.3.ChinaChildre

6、nshospitalofFemmeChildCareCentreofLuoyangcityinHenanprovinceLuoyang471000China.）AbstractObjectives：TocomparedepressioneffectsofRhubarbAglyconeassociated?[基金項目]國家自然科學基金（C03050311）［收稿日期］20100111[通訊作者]﹡李建生，博士，教授，博士生導師，長期從事中

7、醫(yī)防治腦血管病的研究工作。Tel:037165676568；Email:Li_js8@。[第一作者]1劉敬霞，博士，副教授，碩士生導師，長期從事中醫(yī)防治腦血管病的研究工作。Tel:09516880501；Email:ljx199566@。3型號2.5，內徑0.285mm）；凝血酶（濟南軍區(qū)生物制品藥物研究所，批號H41023661）；尿激酶（山東新華制藥股份有限公司，批號05401236）；大黃苷元（河南中醫(yī)學院藥物分析學科提供）。1.

8、2分組與處理大鼠隨機分為假手術組、模型組、用藥組；用藥組又分為尿激酶溶栓組（簡稱溶栓組）、大黃苷元組和聯合組（大黃苷元尿激酶組）。模型組和用藥組大鼠根據腦缺血后干預時間點的不同分為3h、6h、9h3組，各組20只動物。大鼠均于造模前4dig（1次日），大黃苷元組和聯合組用大黃苷元ig（用量為12.96mgkg），其余均灌以等體積的生理鹽水。腦缺血后不同時間點經導管進行區(qū)域動脈給藥，模型組用生理鹽水，溶栓組與聯合組用尿激酶，尿激酶用量50

9、00ukg。，1.3造模及取材參考改良的Zhang法制備自體血栓結合線栓阻塞大腦中動脈制備血栓栓塞性腦缺血動物模型[5]，留置導管。區(qū)域動脈給藥后24h冰盤上取腦，制備標本，待行指標測定。1.4觀察指標1.4.1腦組織病理觀察切取的腦組織用4%的多聚甲醛固定常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色，光鏡下觀察腦組織病理形態(tài)改變，根據受損程度由輕到重進行分級[6]，觀察大鼠例數；病理損傷程度由輕到重分級（鏡下見出血者均為Ⅳ級）：Ⅰ級025%

10、，Ⅱ級2650%，Ⅲ級5175%，Ⅳ級＝75%。1.4.2TUNEL陽性細胞免疫組織化學檢測；操作按試劑盒說明進行；梗死灶半暗帶區(qū)及梗塞區(qū)分別取互不重疊的3個(2010)視野，計TUNEL染色陽性細胞個數，取其均數，進行統計。1.4.3Bax表達免疫組織化學檢測；操作按實際和說明進行；顯微鏡計算機彩色圖像處理系統觀測Bax蛋白陽性反應產物面積；免疫組織化學定量計算公式得出陽性單位（PU）值。1.4.4Caspase3表達免疫組化法檢測；

11、操作按試劑盒說明書進行；顯微鏡計算機彩色圖像處理系統觀測Bax蛋白陽性反應產物面積；免疫組織化學定量計算公式得出陽性單位（PU）值。1.4.5bcl2表達免疫組化法檢測；操作按試劑盒說明書進行；顯微鏡計算機彩色圖像處理系統觀測Bax蛋白陽性反應產物面積；免疫組織化學定量計算公式得出陽性單位（PU）值。1.5統計學處理SPSS11.0統計軟件處理。等級資料用秩和檢驗；計量資料以s表示，單因素方差分析統計。顯著性水準取α＝0.05。x2結果