米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的研究.pdf

1、米托蒽醌（mitoxantrone）是一種蒽環(huán)類(lèi)抗生素，為細(xì)胞周期非特異性廣譜抗癌藥，在臨床應(yīng)用中存在某些較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如心臟毒性。脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物的載體，具有靶向、減毒、增效的優(yōu)良特性，但是由于米托蒽醌的釋放不易控制，限制了其脂質(zhì)體制劑的開(kāi)發(fā)。
　　熱敏脂質(zhì)體通常用相變溫度稍高于體溫的磷脂來(lái)包封藥物，體內(nèi)給藥后，利用局部加熱的方法觸發(fā)脂質(zhì)體攜帶的藥物迅速釋放于加熱部位而產(chǎn)生靶向作用。熱敏脂質(zhì)體加入長(zhǎng)循環(huán)材料，在脂質(zhì)體表面

2、形成親水層和空間位阻，可以避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）的吞噬，降低脂質(zhì)體的血液清除率，從而延長(zhǎng)脂質(zhì)體在循環(huán)系統(tǒng)的滯留時(shí)間，增加脂質(zhì)體的靶向效果。
　　目的：
　　本研究采用米托蒽醌為模型藥物，制備長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體。通過(guò)配合熱療增加脂質(zhì)體藥物在腫瘤區(qū)域的富集并觸發(fā)米托蒽醌迅速釋放,發(fā)揮藥效，從而達(dá)到增加靶向性、提高治療指數(shù)的目的。
　　方法：
　　在處方前研究的基礎(chǔ)上初步確定米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的制備方法：首先制

3、備以檸檬酸為內(nèi)相的空白脂質(zhì)體，然后透析置換外相溶液形成跨膜pH梯度，最后將藥物與空白脂質(zhì)體溶液混合孵育，得到米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體。
　　以包封率和含量為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)優(yōu)化脂質(zhì)體的制備工藝，考察不同外相溶液、孵育溫度、孵育時(shí)間、藥物與磷脂質(zhì)量比等對(duì)脂質(zhì)體的影響，最終確定米托蒽醌脂質(zhì)體的最佳處方。
　　對(duì)制備得到的米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體進(jìn)行了質(zhì)量研究，主要包括外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、包封率和含量等指標(biāo)的測(cè)定。

4、通過(guò)體外釋放實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證脂質(zhì)體的熱敏特性，并且進(jìn)行了五個(gè)月長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)。
　　選用BDFl小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法分別對(duì)米托蒽醌溶液和米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體進(jìn)行體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究。以BDFl小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，考察米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的毒性。以接種了前列腺癌RM-1細(xì)胞的BDFl小鼠為動(dòng)物模型，對(duì)米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的藥效學(xué)進(jìn)行初步研究，對(duì)比了米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體配合不同熱療方式與米托蒽醌游

5、離藥對(duì)前列腺癌的治療效果。
　　考察大鼠重復(fù)注射米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體是否會(huì)產(chǎn)生加快血液清除（accelerated blood clearance，ABC）現(xiàn)象。以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法測(cè)定動(dòng)物血漿中藥物的含量，考察了米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在重復(fù)給藥后的藥動(dòng)學(xué)變化，并對(duì)血樣中的抗PEG的IgM抗體進(jìn)行ELISA檢測(cè)，以揭示其產(chǎn)生藥動(dòng)學(xué)變化的原因。
　　以荷RM-1瘤的BDF1小鼠為實(shí)驗(yàn)

6、動(dòng)物，簡(jiǎn)單研究了米托蒽醌熱敏脂質(zhì)體配合不同熱療方式后米托蒽醌在肝臟和腫瘤部位的藥物分布情況。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳處方為：三種磷脂 DPPC、MSPC、mPEG2000-DSPE的摩爾比為90：10：4，藥物與磷脂的比例為1：10（w/w），內(nèi)相為0.3 mol/L檸檬酸溶液（pH=4.0），以20 mmol/L組氨酸為透析液，孵育溫度35℃，孵育時(shí)間45 min。藥物包封率高，重現(xiàn)性良好。
　　所制備脂質(zhì)

7、體從體外釋放和細(xì)胞水平來(lái)分析，均顯示了良好的熱敏特性。體外釋放實(shí)驗(yàn)中米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在37℃時(shí)1 h藥物釋放不足10％，而41℃時(shí)1 h幾乎可以釋放全部藥物。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，熱敏脂質(zhì)體37℃處理45 min后，對(duì)細(xì)胞抑制不明顯，證明藥物釋放很少；在41℃時(shí)，處理10 min和45 min時(shí)均顯示了良好的抑制作用，證明藥物在此溫度釋放很快。
　　質(zhì)量研究結(jié)果顯示：
　　三批米托蒽醌脂質(zhì)體的平均檢測(cè)結(jié)果如下：pH值為6.53

8、；滲透壓為309 mOsmol/Kg；平均粒徑為100.1 nm；包封率為98.41%；穩(wěn)定性結(jié)果顯示：脂質(zhì)體混懸液在4-8℃條件下存放兩個(gè)月，包封率、pH、粒度、含量均無(wú)明顯變化，但隨儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)脂質(zhì)體的熱敏特性消失。實(shí)驗(yàn)證明熱敏特性的消失是因?yàn)槊淄休祯c內(nèi)水相的檸檬酸溶液存在緩慢的沉積過(guò)程。
　　藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)表明：
　　米托蒽醌游離藥物溶液和脂質(zhì)體的血漿藥代動(dòng)力學(xué)存在明顯差異，米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體組和游離藥物組的AUC

9、、消除半衰期和清除率分別為5.332μg·h·ml-1、1.294 h、0.719 ml·h-1·g-1和0.583μg·h·ml-1、0.412 h、6.691 ml·h-1·g-1，說(shuō)明將米托蒽醌制成長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體可以增加藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間。
　　毒性、藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明：
　　米托蒽醌游離藥和長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的MTD均小于10.2 mg/kg，將米托蒽醌制成熱敏脂質(zhì)體并未明顯降低其毒性；藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中米托蒽醌游離藥

10、與長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體（提前開(kāi)始熱療）對(duì)腫瘤的抑制率分別為27.9%和86.1%。因此米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體可以通過(guò)增加抗腫瘤效果來(lái)提高藥物的治療指數(shù)。
　　ABC現(xiàn)象的研究結(jié)果表明：第一次給藥后AUC為1.905±0.121μg·h·mL-1，CL為1251.291±229.132 mL·h-1·kg-1；第二次給藥后AUC為0.581±0.082μg·h·mL-1，CL為3567.959±374.738 mL·h-1·kg-1；

11、體內(nèi)抗體檢測(cè)證明在第一次靜脈給予米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體后第七天血中抗PEG的IgM抗體水平較高，此時(shí)第二次給藥，該抗體則可以與所給脂質(zhì)體藥物結(jié)合，加快藥物清除。結(jié)合藥動(dòng)學(xué)和動(dòng)物體內(nèi)抗體水平變化證明大鼠重復(fù)注射米托蒽醌長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體誘發(fā)了ABC現(xiàn)象。
　　組織分布的結(jié)果表明，給藥后不同時(shí)間熱療對(duì)藥物的分布存在影響，給藥后立刻開(kāi)始熱療對(duì)腫瘤部位藥物的增加更為明顯。
　　結(jié)論：
　　以米托蒽醌為模型藥物，制備長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂