人外周血淋巴細(xì)胞亞群抗腫瘤效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：對人外周血淋巴細(xì)胞各亞群殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)進(jìn)行比較，尋找具有高效殺傷腫瘤細(xì)胞能力的細(xì)胞亞群，并探索體外優(yōu)勢擴(kuò)增該群細(xì)胞的方法，同時對體外擴(kuò)增的該細(xì)胞亞群的抗腫瘤效應(yīng)進(jìn)行分析，從而建立腫瘤細(xì)胞治療的新方法。
　　 方法：采集健康志愿者的外周血，標(biāo)記人淋巴細(xì)胞譜系標(biāo)志CD3、CD56、CD8、CD4等對各樣本淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析和分選。根據(jù)自然殺傷細(xì)胞(narural killercell，NK)細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cyt

2、otoxic lymphocyte，CTL)細(xì)胞在腫瘤免疫中的作用，本課題關(guān)注的淋巴細(xì)胞亞群包括CD3-CD56+CD8+細(xì)胞、CD3-CD56+CD8-細(xì)胞、CD3+CD56+細(xì)胞、CD3+CD56-CD8+細(xì)胞以及CD3+CD56-CD8bri細(xì)胞。分選的淋巴細(xì)胞亞群與8種不同個體、不同組織器官來源的人腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。通過各淋巴細(xì)胞亞群與各腫瘤細(xì)胞系的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)體系，尋找到具備高效廣譜抗腫瘤能力的淋巴細(xì)胞亞群，并借助流

3、式細(xì)胞儀對其進(jìn)行了表型和細(xì)胞因子分泌譜的檢測。利用現(xiàn)有基礎(chǔ)研究成果，通過體外添加白細(xì)胞介素2(interleukin-2，IL-2)、同種異體樹突狀細(xì)胞等方式，建立體外擴(kuò)增該細(xì)胞亞群的方法學(xué)。擴(kuò)增后細(xì)胞經(jīng)體外精細(xì)亞群分選后培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，確定其是否來自于體內(nèi)原有細(xì)胞亞群。最后通過體內(nèi)和體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，確證體外擴(kuò)增的該細(xì)胞亞群能否保持原有的抗腫瘤效應(yīng)。
　　 結(jié)果：對人外周血各淋巴亞群體外殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)比較的結(jié)果表明，每個樣本中CD8

4、+CD56+細(xì)胞對60％以上腫瘤細(xì)胞系的殺傷效率最高。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，CD8+CD56+細(xì)胞活化后可表達(dá)CD25和CD69，不表達(dá)CD107a，并分泌IL-2、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和干擾素γ(interferon-γ，IFN-γ)等細(xì)胞因子。體外精細(xì)亞群分選后培養(yǎng)，表明體外擴(kuò)增的CD8+CD56+細(xì)胞仍然來源于原有CD8+CD56+細(xì)胞亞群。該亞群可通過添加IL-2和同種

5、異體樹突狀細(xì)胞進(jìn)行體外活化和擴(kuò)增，且擴(kuò)增后該亞群對腫瘤細(xì)胞系的殺傷能力能夠繼續(xù)保持。體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，擴(kuò)增后CD8+CD56+細(xì)胞能夠有效抑制HepG2腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長。
　　 結(jié)論：人外周血各淋巴亞群中CD8+CD56+細(xì)胞殺傷腫瘤效應(yīng)最強(qiáng)，殺傷腫瘤譜最廣。CD8+CD56+細(xì)胞活化后表達(dá)T細(xì)胞活化相關(guān)標(biāo)志，分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ等細(xì)胞因子，但并不表達(dá)CD107a，提示其抗腫瘤效應(yīng)可能通過誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡