小腸移植感染與抗微生物肽表達(dá)的相關(guān)研究.pdf

1、目的:(1)研討大鼠小腸移植缺血再灌注術(shù)后內(nèi)毒素血癥與炎癥因子的表達(dá)。(2)探討小腸移植缺血再灌注術(shù)后抗菌肽的表達(dá)及意義。(3)探討不同免疫抑制藥物(他克莫司、環(huán)孢霉素、雷帕霉素和雷公藤)對(duì)人腸系細(xì)胞(HT29和Caco一2)β一防御素表達(dá)的影響及機(jī)制。(4)探討器官簇移植的感染特點(diǎn)和處理經(jīng)驗(yàn)。 方法：(1)Wister大鼠小腸移植到SD大鼠，在缺血再灌注后Oh、2h、6h、12h和24h后手術(shù)開(kāi)腹取回腸、結(jié)腸、腸系膜淋巴結(jié)、脾

2、臟和肺組織，同時(shí)從下腔靜脈取全血。用鱟試劑盒檢測(cè)血中內(nèi)毒素(LPS)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞因子，光鏡下對(duì)移植粘膜進(jìn)行病理檢查。(2)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR、原位雜交和免疫組化等方法進(jìn)行抗微生物肽(防御素和溶菌酶)的檢測(cè)。(3)人腸系細(xì)胞在含有／不含有FK5O6、CsA、Rapa和雷公藤的細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)后，加入白細(xì)胞介素一1α(IL一1β )再共培養(yǎng)3h，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)人β一防御素(HBD一1和HBD一2

3、)mRNA拷貝數(shù)，免疫印跡法(western blot)檢測(cè)細(xì)胞上清中的HBD一2濃度，電泳遷移率實(shí)驗(yàn)法(EMSA)和ELISA法檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子kβ(NF—kβ)信號(hào)途徑。(4)對(duì)兩例帶小腸器官簇移植受體術(shù)后病原體感染和處理的情況作一回顧性的分析。 結(jié)果：(1)小腸移植外周血內(nèi)毒素在缺血再灌注后6h達(dá)到最高峰，白細(xì)胞介素-2(IL-2)在缺血再灌注后2h達(dá)到高峰，干擾素-γ(IN-γ)在缺血再灌注后6h達(dá)到高峰，腫瘤壞死因子α(

4、TNF-α)在缺血再灌注后12h達(dá)到高峰，白細(xì)胞介素-4(IL-4)在缺血再灌注后24h達(dá)到高峰。白細(xì)胞介素-1 β(IL-1β)沒(méi)有變化。腸系膜淋巴結(jié)和脾臟粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)在試驗(yàn)組表達(dá)明顯增強(qiáng)。移植小腸出現(xiàn)腸粘膜損害。(2)小腸缺血再灌注后回腸大鼠防御素-5(RD-5)mRNA、腎大鼠β-防御素-1(RBD-1)的轉(zhuǎn)錄下調(diào)，肺、結(jié)腸大鼠β-防御素-2(RBD-2)轉(zhuǎn)錄上調(diào)。小腸溶菌酶表達(dá)增加。(3)FK50

5、6、CsA、Rapa促進(jìn)人腸系細(xì)胞HBD-2在IL-1 β誘導(dǎo)下的表達(dá)，雷公藤多甙抑制HBD一2的表達(dá)。(4)兩例帶小腸器官簇移植受體術(shù)后發(fā)生嚴(yán)重感染，一例術(shù)后103d死于巨細(xì)胞病毒感染，另一例術(shù)后52d死于嚴(yán)重的細(xì)菌感染。 結(jié)論：小腸移植缺血再灌注后早期即發(fā)生了內(nèi)毒素血癥和炎癥反應(yīng)。小腸缺血再灌注術(shù)后防御素與溶菌酶的表達(dá)與內(nèi)毒素血癥有關(guān)。不同免疫抑制藥物對(duì)人腸系細(xì)胞HBD-2表達(dá)的影響不同，上述作用部分與NF-k β信號(hào)途徑有