家蠶腸球菌16S rDNA序列及生化特性分析.pdf

1、從家蠶消化道分離得到5株腸球菌(C1、GC、FD、A20、F1-4)，其中F1-4對(duì)家蠶微孢子蟲(Nosemabombycis，簡(jiǎn)稱N.b)體外發(fā)芽有抑制作用。本文研究了這5株分離菌株的生理生化特征和16SrDNA序列，并與腸球菌種特異性探針序列進(jìn)行了比對(duì)。以期為進(jìn)一步研究家蠶腸球菌的多樣性及家蠶微粒子病的生物防治奠定基礎(chǔ)。 CTAB法抽提基因組DNA，采用腸球菌通用引物擴(kuò)增16SrDNA，并進(jìn)行序列測(cè)定。將測(cè)序結(jié)果用BLAST

2、軟件與GenBank中的相關(guān)屬種的16SrDNA序列進(jìn)行比較。從GenBank中調(diào)取腸球菌屬(Enterococcus)32個(gè)菌株的16SrDNA序列用于系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析。16SrDNA全序列用Clustalx(1.8)軟件包排序，選擇大腸桿菌(Escherichiacoli)為外群，用MEGAversion2軟件包中的Kuimura2-ParameterDistance模型計(jì)算進(jìn)化距離，用Neighber-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹

3、，1000次隨機(jī)抽樣，計(jì)算自引導(dǎo)值(Bootstrap)以評(píng)估系統(tǒng)發(fā)育樹的置信度。由16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果可知，分離菌株與蒙氏腸球菌(EnterococcusmundtiiAJ301836)有高同源性，在系統(tǒng)發(fā)育樹中聚為一群。比較分離菌株16SrDNA序列和腸球菌種特異性探針序列，C1、F1-4、FD、GC、A20含有與蒙氏腸球菌種特異性探針完全相同的序列，與其它腸球菌探針均不完全相同。生理生化特征測(cè)定結(jié)果表明，除A20外，分離