海風(fēng)藤對Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β及TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、背景：
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種常見的以記憶損害和認(rèn)知障礙為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病，神經(jīng)炎性斑是其特征性病理表現(xiàn)之一。AD發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，但隨著相關(guān)研究的深入，其發(fā)生的神經(jīng)炎癥機(jī)制受到越來越多學(xué)者的重視。Aβ1-42（β-amyloidprotein1-42，Aβ1-42）是神經(jīng)炎性斑的主要成分，在小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤、活化并大量釋放炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素1β(Interle

2、ukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor，TNF-α)等方面可能起著重要作用，其中可溶性Aβ1-42寡聚體的促炎作用可能更為重要。這些炎癥因子可以對神經(jīng)元造成炎性損傷，從而導(dǎo)致AD發(fā)生。海風(fēng)藤是胡椒科植物風(fēng)藤的干燥藤莖，具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。本實驗?zāi)康氖怯^察可溶性Aβ1-42寡聚體對小膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)的影響及海風(fēng)藤提取物的干預(yù)作用，為進(jìn)一步闡明AD神經(jīng)炎性損傷的機(jī)制及發(fā)現(xiàn)有效的藥物防治措施

3、奠定理論基礎(chǔ)。
　　目的：
　　觀察蛋白水平上Aβ1-42寡聚體對小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、TNF-α表達(dá)的影響，以及海風(fēng)藤提取物對此過程的干預(yù)作用。探討體外穩(wěn)定存在的寡聚體Aβ1-42的制備方法。
　　方法：
　　1.小鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代、凍存及觀察;
　　2.Aβ1-42寡聚體的研制并觀察其穩(wěn)定性;
　　3.將小鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為三組:空白對照組、寡聚體Aβ1-42組（給予Aβ1-42寡聚

4、體）、寡聚體Aβ1-42+海風(fēng)藤提取物組（在給予Aβ1-42寡聚體的基礎(chǔ)上加用海風(fēng)藤提取物干預(yù)）。按實驗要求作用48小時后，采用免疫蛋白印跡法(WesternBlot)檢測各組小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.顯微鏡下觀察體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞，靜息態(tài)時呈細(xì)長分枝狀，受刺激后呈阿米巴樣。
　　2.電鏡觀察在4℃冰箱存放2周后的寡聚體Aβ1-42結(jié)果:寡聚體Aβ1-42在透射電鏡下以單體形

5、式存在，未發(fā)現(xiàn)纖絲狀物質(zhì)形成，形態(tài)為顆粒形或球形，大小比較均一，直徑約為15～30nm。
　　3.Western-blot檢測各組小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)量結(jié)果顯示:Aβ1-42寡聚體組IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)量分別為83.3±8.5、32.0±3.6，較空白對照組25.2±13.9、2.6±1.7明顯增加（t=7.46、11.74，均P=0.000），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;Aβ1-42寡聚體+海風(fēng)藤提取物組

6、IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)量分別為59.3±2.7、21.7±4.5，較Aβ1-42寡聚體組明顯減少(t=3.08、4.38，P=0.022、0.005)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論；
　　1.Aβ1-42寡聚體能夠激活小膠質(zhì)細(xì)胞、并增加IL-1β、TNF-α蛋白的表達(dá)量，海風(fēng)藤提取物能夠明顯抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，降低小膠質(zhì)細(xì)胞炎性因子的表達(dá)量。
　　2.該實驗成功制成了能穩(wěn)定存在的Aβ1-42寡聚體，模擬了A